191414. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antagonista hatás vazopresszin analógok előállítására
1 191 414 2 gokat is tartalmaznak. Előnyösek azok a gyógyszerkészítmények, melyek a vazopresszin-analógokat komplexek formájában tartalmazzák, mert ezek elhúzódó hatást biztosítanak a készítménynek. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. A kiindulási vegyület és két, az irodalomban még le nem írt aktívészter előállítását az utána következő A., B. és C. példákban ismertetjük. Az aminosav- és peptid-származékok jelölésére használt rövidítések az UPAC-IUB által ajánlottak fJ. Bioi. Chem., 247, 977. (1972)]. A nagy kezdőbetűvel írt hárombetűs aminosav-rövidítések, ha más nincs megadva, az L-antipódot jelentik. Egyéb rövidítések: Z = benziloxikarbonil-, Boc - lcrc-butiloxikarbonil-, Mc=metü-, Et = etil-, iízl = benzil-, Tos = tozil-, OSu = N-szukcinimidoxi-, OTcp = 2,4,5-triklór-feniloxi-, ONp = p-nitrofeniloxi-, OPfp = pentafluor-feniloxí-, OPcp = pentaklór-feniloxi-, Pmp = ß-merkapto-ß,j3-ciklopentametildnpropionil-csoport. A bepárlások csökkentett nyomáson, rotációs bepárlókészüléken (Rotavapor, Büchi, Svájc) történtek. Az olvadáspontokat dr. Tottoli-féle készülékben (Büchi, Svájc) határoztuk meg. A vékonyréteg-kromatogramokat előregyártott kovasavgélnél rétegen (HPTLC-Fertigplatten, Merck) készítettük az alábbi térfogatarányú oldószer-elegyekben: 1. etil-acetát: (piridin : ecetsav : víz = 20:6:1) = 3 :2 2. 1 -butanol: ecetsav : víz = 4:1:1 3. 1-butanol: etil-acetát : ecetsav : víz = 1 :1 : J : 1. A krcmatogramokat ninhidrinnel, majd klórozás után tolidinnel hívtuk elő. Az optikai forgatóképességet Perkin Elmer 141 számkijelzésű fotoelektromos polariméteren mértük. A nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálatokat egy ALTEX 110A típusú pumpából, LABOR MIM Liquodet 308 típusú változtatható hullámhosszúságú detektorból, Rheodyne 7125 típusú loopinjektorból (10 pl) és K.UTESZ Type 175 írószerkezetből álló rendszer segítségével végeztük egy 4,6 mm X X 25 cm-es LATEX Ultrasphere-ODS 5 pin oszlopon, 1 ml/perc áramlási sebességgel, 215 nm hullámhosszon. Eluensként actonitril : 0,05 m koncentrációjú NaH2P04- puffer 33 :67 térfogatarányú elegyét használtuk. 1. Példa 1. lépés N-terc-Butiloxikarbonil-S-benzil-L-ciszteinilL-propil-Nu-tozil-L-arginil-glicimmid 20,0 g (34,4 mmol) Boc-Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2-ot (A. példa) 100 ml trifiuor-ecetsavban oldunk. Az oldatot 30 perc után, keverés közben 1 liter éterbe öntjük. A csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, és megszárítjuk. A kapott H-Pro-Arg(Tos) Gly-NH2-trif!uor-acetátot (20,98 g, R£: 0,06, Rí: 0,18) 40 ml dimetii-formamidban oldva, 4,82 ml (34,4 minői) trietil-amin jelenlétében 14,05 g (34,4 mmól) Boc-Cys(Bzl)-OSu-rel reagáltatjuk. A reakcióelegyet 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, közben pH-ját trietil-amin adagolással 8-on tartjuk. Másnap a dimetil-forinamidot le desztilláljuk, a maradékot 300 ml etil-acetátban oldjuk, 180 ml 5 %-os nátrium-klorid-oldattal, majd kétszer 180 ml 8 %-os nátrium-hidrogén-karbo- 4 nát-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A maradékot éterrel megszilárdítjuk, szűrés és szárítás után 50 ml kloroformban oldjuk, és 250 ml éterrel kicsapjuk. A kloroform-éteres átcsapást mégegyszer megismételve 21,86 g (82,0%) Boc-Cys(Bzl)-Pro- Arg(Tos)-Gly-NH2-ot kapunk. Amorf anyag, Rj : 0,63, P-f: 0,67; [a]D = —38,0 (c=l, metanol), -33,3 (c = = -1, dimetil-formamíd). 2. lépés N-terc-Butilo: ikarbonil-L-aszparaginil-S-henzil-L-ciszteiníl-L-prolil-NTM-tozil-L-arginil-glicimmid 15,50 g (20,0 minői) Boc-Cys(ßzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly- E H2-oí (1. lépés) 78 mi trifluor-ecetsavban oldunk, majd a : oldatot 30 perc múlva 780 ml éterbe öntjük. A csapadekot szűrés után éterrel mossuk, és megszárítjuk. 15,30 g ('•‘7,%) M-Cys(Bz!)-Pro-Arg(Tos)-Gly-NIl2-trifluor-acetátot kapunk (Rj: 0,21, R* : 0,34). Az előzőleg kapott tetrapeptidamid-trifluoracetátot 36 mi dimetii-formamidban oldjuk, és 2,72 ml (19,4 ~ mmól) trietil-amin jelenlétében 8,77 g (21,3 mmól) Boc- Asn-OTcp-rel reagáltatjuk. Az oldatot 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, pH-ját trietil-amin adagolással 8 on tartjuk. Másnap a reakcióelegyet bepároljuk, a maradékot 70 ml etil-acetátban oldjuk. A termék kiválása azonnal megindul. A szuszpenziót 2 órán át hűtőszekrényben tartjuk, majd szűrjük. A csapadékot etanollal, éterrel mossuk, és megszárítjuk. A nyers terméket (18,0 g) 90 ml etanolban szuszpendáljuk, forrásig melegítjük, m.ijd másnapig hűtőszekrényben állni hagyjuk. Szűrés, et.molos, éteres mosás és szárítás után 13,06 g (73,5%) Bcc-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2-t kapunk. Olvadáspontja: 194-195 °C; (bomlik); Rf : 0,48, Rf : 0,53; [a\D = -44,0° (c = 1, dimetil-formamid). 3. lépés N-terc-Butiloxikarbonil-L-volil-L-aszparaginil-S-benzil-L-ciszteinil-L-prolil-Nu-tozil-L-arginil-glicimmid 12,90 g (14,5 mmól) Boc-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)Gh -NH2-oí (2. lépés) 65 ml trifluor-ecetsavban oldunk. Az oldatot 30 perc után, keverés közben 650 ml éterhez adjak. A csapadékot szűrjük, éterrel mossuk, és megszárítjuk. A kapott H-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly- NH2-trifluor-acetátot (13,15 g Rf : 0,15, R* : 0,29) 32 ml dimetii-formamidban oldjuk, és 2,03 ml (14,5 mmól) trietil-amin hozzáadása után 5,47 g (17,4 mmól) Boc-Val- OS i-rel reagáltatjuk. A reakcióelegyet 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, közben trietilamin adagolással pH ját 8-on tartjuk. Másnap a dimetil-formamid ledesztilklása után visszamaradt géles anyagot etil-acetáttal szű'őre visszük, etil-acetáttal és éterrel mossuk, majd megszárítjuk. A nyers terméket (13,93 g) 70 ml etanolban szuszpendáljuk, a szuszpenziót forrásig melegítjük, majd 3 órán át hűtőszekrényben tartjuk. Szűrés,etanolos és éteres mosás, szárítás után 12,50 g (87,2%) Boc-Val- Asn-Cys(Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2-ot kapunk. Olvadáspontja: 189-191 C, (bomlik); Rj: 0,50, Rj : 0,55; [a]p = —38,0° (c = 1, dimetil-formamid). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
