191371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új muramil-peptid-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

191 371

2

MS’ = +10±r (c = 0,675, metanolban),

Rf = 0,08 (kloroform-metanol-viz, 70:30:5 rendszerben),

Rf = 0,15 (etilacetát-n-butanol-piridin-ecetsav-víz 42:21:21:6:10 rendszerben)és Rf = 0,30 (klorofonn-metanol-víz-ecetsav, 70:40:9:1 rendszerben)

18. példa

Patkány alveoláris makrofágokat izoláltunk tüdőmosással, tenyésztettük, majd in vitro 24 órán át vagy a hatóanyaggal telített liposzóniákkal, vagy a hatóanyagot tartalmazó fiziológiás sóoldattai (phosphate buffered saline, PBS) készített oldatával inkubáljuk. Ezután 12SI- jelzett tumorsejteket adunk hozzá és további 72 órán át inkubáltuk. Ezután kimostuk az elhalt tumorsejteket és radioaktivitásuk alapján meghatároztuk a még elő tumorsejtek számát. A makrofág-aktivitást a citotoxicitás alapján értékeljük, azaz a kísérlet végére elpusztult tumorsejtek aránya alapján. A fajlagos citotoxicitást (%) az alábbi képlet szerint számítjuk:

cpm a makrofággal és hatóanyaggal inkubált tumorsejtekben

100X-----------------------------------------------------------cpm a makrofággal és PBS-sel inkubált tumorsejtekben

A fenti vizsgálati módszert részletesen ismertetik

I. J. Fidlre és munkatársai, J. Bioi-Response Modifiers 1, 43—55 (1982). Az alábbi táblázatban néhány találmány szerinti hatóanyag fajlagos citotoxicitását adjuk meg:

I. N-acetil-muramil-L-aIanil-D-glutamil-(Ca)-n-butilészter-(Ca)-L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-sn-glicero-3- hiroxi-foszforiloxi)-etilamid-nátriumsó;

II. N-propionil-dezmetilmuramil-L-alanil-D-glutamil(Ca)-n-butilészter-(Ca)-L-alanin-2-(l ,2-dipalmitoil-snglicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó:

III. N-propionil-dezmetilmuramil-L-alanil-D-glutamil(Ca)-n-metilészter-(C7)-L-alanin-2-(l,2-dipa!mitoil-snglicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó;

IV. N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamil-(CQ)-tercbutilészter-(CT)-L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-sn-glicero-3- hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó;

V. N-Acetil-muramil-L-alanil-D-glutamiI-(CQ)-mctilészter-(C7)-L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-sn-gUcero-3- hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó;

VI. N-Propionil-dezmetiinruramil-L-alanil-D-glutamil(Ca)-terc-butilészter-(C7)-L-alnin-2-(l,2-dipamitoi!-sng!icero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó.

2. táblázat

Fajlagos citotoxicitás

Haló- Hatóanyag 0,2 ml

Hatóanyag 100 pg

anyag PBS-ben

iiposzómában/0,2 ml

jugltenyészet

Mgltenyésztt

0,02 0,2 2

20 0,02 0,2 2 20

I.

39

59

56

51

44

II.

21

48 74

10

23

11

III.

3

81

47

64

76

79

IV.

23

18

20

64

68

52

V.

5

60

VI.

29

73

19. példa

0,5 % hatóanyagot tartalmazó 1000 tabletta előállítása

Összetétel 1000 tablettára

N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamil-(CQ )-metilészter-(C7)-L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-sn-glicero-3- hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó 0,5 g Laktóz (őrölt) 43,0 g

Kukoricakeményítő 52,0 g

Pharmacoat 603® (hidroxipropil-metil-cellulóz, mely 28—30 % inctbxicsoportot tartalmaz, gyártó:

Shinetsu Chemical Company, Tokyo,

Japán) 3,0 g

Aerosil®

(kolloidális szilíciumoxid, gyártó:

Degussa, Frankfurt, NSZK) 1,0 g

Magnéziumsztearát 0,5 g

Előállítás

A hatóanyagot előre összekeverjük 15 g laktózzal. Ezt ez előkeveréket keverjük össze 28 g laktózzal és 47 g kukoricakeményítővcl. A porkeverékből és a Pharmacoat vizes oldatából egy granulálható masszát készítünk, melyet granulálunk, szárítunk és őriünk. Ehhez keverjük a maradék 5 g kukoricakeményítőt, Aerosilt és magnéziumsztearátot, és 1000, egyenként 100 mg súlyú tablettává préseljük.

A tabletták az önmagukban ismert módszerek szerint gyomornedv-rezisztens lakkal vonhatók be.

20. példa

Hatóanyag feldolgozása fagyasztva szárított por alakban.

1 mg N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutamil-(Ca)-metilészter - (C7) - L - alnin - 2 - (1,2 - dipalmitoil - sn • glicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsót és 500 mg mannitot (pirogénmentes) injekciós célra alkalmas víz-5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

18