191371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új muramil-peptid-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 191 371 2 9,4 g (11,1 mmól) N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-terc-butilészter a 11. példában leírtakhoz hasonlóan alakítunk aktív észterré, majd szintén az ott leírtak szerint 6,48 g (8,2 mmól) L-alanin-2-(l ,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamiddal kapcsoljuk trietilamin jelenlétében. A nyersterméket 250 ml kétszer desztillált vízben szuszpendáljuk és rövid ideig melegítjük 37 °C-on. Ezután 15 percen át keverjük jéggel történő hűtés közben, az oldhatatlan diciklo-hexilkarbamidot szűrjük és a szűrletet az 1. példában leírt módszer szerint dializáljuk (AMICON keverőcetla 402, ultraszűrő PM 30/76 mm 0). A cellában visszamaradt oldatot (120 ml) liofilizáljuk és a terméket 550 g 60 jelű szilikagélen, a szokásos módon kromatografáljuk. A kívánt anyagot összegyűjtjük, 200 ml kétszer desztillált vízben (pH = 7) oldjuk, sterilre szűrjük (0,45 p) és liofilizáljuk. így 8,39 g (az elméleti hozam 78 %-a) N-acetilmuramil - L - alanil - D - glutamil - (C„) - tere - butilészter-(C7)-L-alanm-2-(l ,2-dipalmitoil-sn-g!icero-3-hidroxi - foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsót kapunk, színtelen por alakjában (a termék 3,4 mól kristályvizet tartalmaz). [a]p= +14°±1° (c = 0 817, 10 %-os ecetsavban) Rf = 0,29 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0,53 (ecetsav-etíl-észter-n-butanol-piridin-ecetsavvíz, 42:21:21:6:10 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőppen állítjuk elő: Az 1. példában leírtakhoz hasonlóan N-acetil-4,6-0- izopropilidén-muraminsav-nátriumsót és L-alanil-D-glutaminsav-(CQ)-terc-butilészter-(C7)-benzilészter kapcsolunk diciklo-hexil-karbodiimid-N-hidroxi-szukcinimid módszerrel. Az izopropilidéncsoport 60 %-os ecetsavban történő savas hasítása és a benzilcsoport katalitikus hidrogénezéssel történő eltávolítása után. az 1. példában leírtakhoz hasonlóan nyerjük az N-acctil-muramil-L-alanil- D-glutaminsav-(Ca)-terc-butilésztert, színtelen por alakjában. [cv]p° = +44°±1° (c = 1,004, metanolban) Rf = 0,20 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0,41 (acetonitril-víz, 4:1 rendszerben). A kiindulási anyagként alkalmazott dipeptid-származékot a következőképpen állítjuk elő . 38,3 g (63,5 mmól) N-[2-(4-bifenilil>propil-oxi-karboniI]-L-alanil-D-glutaminsav-(CQ)-terc-butilészter-(C7)benzilésztert oldunk 700 ml 9:1 árányú trifluor-metanol-víz elegyben és ugyanilyen oldószerelegyes 1,23 n sósavoldatot csepegtetünk hozzá (1 terfogatrész tömény sósav és 9 térfogatrés/, trilluor-etanol), míg a pH érték 1,5 nem lesz (a csepegtetés 2 és fél órán át tart, 51,66 ml a felhasznált mennyiség, az elméletileg számított 81 %-a). Az enyhén sárga színű oldatot forgóbepárolón. vízsugárszivattyús vákuumban, 30 °C-on, pontosan 100 ml térfogatúra pároljuk be, 200 ml dioxánt adunk hozzá és az egészet fagyasztva szárítjuk. A félig szilárd maradékot 30 ml vízmentes dietiléterben oldjuk és 0 °C és 5 °C közötti hőmérsékleten keverés közben 150 ml petrolétert adunk hozzá. Ezután hagyjuk hidegen (-20 °C) 12. példa állni, dekantáljuk cs ezt a műveletet még kétszer megismételjük. Az olajos maradékot végül 100 ml tec-butanolban oldjuk, liofilizáljuk és a maradékot nátronazbeszt (Merck) felett nagy vákuumban szárítjuk. így az l.-al3nil-D-glutaminsav-(Ca)-terc-butilészter(C7)-bcnzilészler-hidrokloridot kapjuk erősen higroszkópos por alakjában, [aj[j° =+7°±1° (c = 1,630, kloroformban) Rf = 0,60 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0.45 (n-butanol-ecetsav-víz, 10:1:2,8 rendszerben). A védett vegyületet a következőképpen állítjuk elő: 65,96 g (0,2 mól) D-glutaminsav-(Ca)-terc-butilészter-(C7)-benzilészter-hidroklorid és 65,47 g (0,2 mól) N-[2-(4-bifcnilil)-propil-oxi-karbonil]-L-alanin 650 ml vízmentes dimetilformamiddal készített és 0 °C-ra hűtött oldatához keverés közben 22 m! (0,24 mól) N-metil-morfolint, majd 59,11 g (0,24 mól) 2-etoxi-N-etoxi-karbonil-1,2-dihidro-kinolint (EEDQ) adunk. A reakcióelegyet 10 órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd az oldatot forgóbepárlón 30°C-on bepároljuk. A maradékot 1 liter etilacetátban oldjuk, ötször extraháljuk 200-200 ml vízzel, a vizes fázist 0,5 liter etilacetáttal visszaextraháljuk. majd az egyesített szerves extraktumokat szárítjuk. Az oldószert lepároljuk, a nyersterméket (150 g) 60 jelű szilikagélen (1:20), töbszöri kromatografálással tisztítjuk. Eluálószerként etilacetátot alkalmazunk. így N-[2-(4-bifenilil)-propiloxi-karboniI]-L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-terc-butilészter-(C7)-benzilésztert nyerünk, színtelen olajként. [o|q> = — )4°±r (c = 1,625, etilacetátban) Rf = 0,73 (kloroform-izopropanol-ecetsav, 70:8:2 rendszerben) és Rf = 0,51 (toluol-ecetsav, 1:1 rendszerben). A kiindulási anyagként szolgáló D-giutaminsav-(Ca)terc-butilészter-(C7 >benzilészter-hidrokloridot hasonlóan állítjuk elő, mint az L-származékot, tehát D-glutaminsav-(C7)-benzilésztert reagáltatunk izobuténnal, 1,4- dioxán és kénsav keverékében [az eljárást R. Roeske ismerteti a J. Org. Chem., 28, 1251 (1963) helyen], A termék színtelen tűkristály olvadáspontja 108— 109 °C. [ajp0 = —16°±1° (c = 1,235, etanolban) Rf = 0 ,84 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0,64 (ecetsavetilészter-n-butanol-piridin-ecetsavvíz, 42:21:21:6:10 rendszerben). 13. példa 4,62 g (6.05 mmól) L-alanin*2-(l,2-dipalmitoU-sng!icero-3-!iidroxi-foszforiloxi)-etilatnid 100 ml 70:30:2 arányú kloroform-izopropanol-víz eleggyel készített oldatához keverés közben, 15 °C-on, 10 perc alatt 14,52 ml (7,26 mmól) 0,5 mólos, 70:30:2 arányú kloroformizopropanol-víz eleggyel készített trietilamin oldatot csepegtetünk. Ezután 20 perc alatt összesen 6,0 g (7,26 mmól) N-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
