191371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új muramil-peptid-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 191 371 2 propionil-dezmetil-niuramil-L-alanil-D-glutaniinsi'-(Ca )metilészter-(C7)-N-hidroxi-szukcinimidészert — amely még kevés diciklohexilkarbamidot tartalmaz — a< ink az oldathoz, négy egyenként 1,5 g-os részletben, szil; d formában. Eközben az oldat szemmel láthatóan varos lesz. A reakcióelegyet 15 percen át keverjük, 15'2-on, majd a hűtést megszüntetve további két cs féi ó ín át keverjük szobahőmérsékleten. Az így nyert zavaros reakcióoldatot vákuumbat pároljuk be 30°C-on. A nyersterméket (10,75 g) ezután 170 ml kétszer desztillált vízben szuszpendáljuk ipH = 5.5), a szuszpenzió pH-ját0,3 ml trietilamin hozzáadásával 6.0 értékre állítjuk, az oldhatatlan diciklohexílkarhamidot szűrjük és a szűrletet nagyvákuumban liofilháijuk. Az így nyert liofilizátumot 300 ml kétszer desztillált vízben oldjuk és az oldatot AM ICON dializáló cellában (402 modell, ultraszűrő PM 10/76 mm <p) 3 bar túlnyomáson 75 ml térfogatúra szűkítjük be, majd 250 ml 1:1 arányú foszfátpuffcr-nátriumkloridoldattal (egyaránt 0.1 mólos tömcnyscgíiek, pH = 7) és 1750 ml kétszer desztillált vízzel szemben kloridmentesre szűrjük. A cellában visszamaradó körülbelül 75 ml oldatot egymásután két Millipore-szűrőn (NALGENE S, 0,45 p és 02, p) szűrjük és az így kapott színtelen oldatot nagyvákuumban liofilizáljuk. így 7,36 g még szennyezett színtelen, poralakú N-propionil-l-dezmetilmuramil-L-alanil-D-glutamil-(C0)-metilészter - (C7) - L - alanin - 2 - (1,2 - dipalmitoii - sn - glicero - 3 - hidroxi - foszforil - oxi) - etilamid • nátriumsót 7:17:18:6 arányú széntetraklorid-kloroform-metanol- 0,5 %-os nátriumhidroxidoldat eleggyel végzett CRAIG- megoszlatással tisztítjuk. A tisztítás során 547 lépcsőt alkalmazva, a kívánt terméket a 160-220 frakciók tartalmazzák; K = 0,58. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és nagyvákuumban melegítés nélkül (hűtés közben) szárazra pároljuk. így színtelen port nyerünk, mely tartalmaz még nátriumkloridot. Ennek eltávolítására a terméket 600 ml kétszer desztillált vízben oldjuk és AMICON-dializáló cellában (402 modell, ultraszűrő Ph 30/76 mm <p) 3 bar túlnyomáson először körülbelül 50 ml belső térfogatra, szűkítjük be, majd összesen 1750 ml kétszer desztillált vízzel kloridmentesre szűrjük. A cellában visszamaradt oldatot (kb. 50 ml) végül egymásután két Millipore-szűrőn (NALGENE S 0,45 p, illetve 0,2 p) sterilre szűrjük és nagyvákuumban liofilizáljuk. így 5,64 g (az elméleti hozam 71,2 %-a) N-propionildezmetilmuramil - L - alanil - D - glutamil - (Ca ) - metilészter - (C7) - L -alanin - 2 - (1,2 - dipalmitoii - sn - gliccro-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsót nyeljük színtelen por alakú anyagként. A termék 1,90 mól kristályvizet tartalmaz. \a\m +3.7°+0.i° (e = 0.672: kloroformban). I« 1(5’ I l.7° H).l" (c - 1,044; vízben), Rf = 0,42 (kloroform-mctanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0,62 (etilacetát-n-butanol-piridin-ecctsav-víz; 42:21:21:6:10 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 5,12 g (10,1 mmól) N-propionil-dezmetil-muramil-L- alaml-D-gtutaminsav-a-metilésztert keverünk össze 100 14 ml 7:3 arányú kloroform-izopropanol eleggyel, ezután 10 ml dimetilformamidot hozzáadva tiszta oldatot nyerünk. Ehhez az oldathoz 2,68 g (13 mmól) diciklohexilkarbodiimidet és 1,50 g (13 mmól) N-hidroxi-szukcinimidet adunk, majd a tiszta színtelen oldatot másfél órán át keverjük szobahőmérsékleten, végül 17 órán át hagyjuk állni 4 °C-on. A keletkezett szuszpenzióhoz 400 ml dietilétert adunk és még egy órán át keverjük szobahőmérsékleten. így kristályos anyagot nyerünk, melyet szűrünk, dieíiléterrel mosunk és foszforpentaoxid felett, vákuumban szárítunk. A nyersterméket az N-propionil-dezmeülmuramil-L- alanil - D - glutaminsav - (Ca) - inetilészter - (C7) - N - hidroxi-szukcinimidésztert, mely még kevés diciklobexil-karbamidot tartalmaz, tisztítás nélkül használjuk fel. Rf = 0,46 (kloroform-metanol 5:1 rendszerben) és Rf = 0,72 (kloroform-metanol 7:3 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 13.0 g (21,75 mmól) N-propionil-dezmeti!muramil-L- alanil - D - glutaminsav - (Ca) - metilészter - (C7)-benzilcszter 250 ml 20:1 arányú dimetoxi-etán-víz eleggyel készített oldatát 2,5 g 10 %-os palládium-szán katalizátor jelenlétében egy órán át hidrogénezzük, normál nyomáson és szobahőmérsékleten. Ezután a katalizátort szűrjük, a szűrietet vákuumban szárazra pároljuk, a keletkezett maradékot háromszor 50-50 ml vízzel elkeveijiik és ismételten bepároljuk. A maradékot ismét 100 ml kétszer desztillálta vízzel oldjuk, az oldatot Millipore-szűrőn (NALGENE S, 0,2 p) szűrjük és nagyvákuumban liofilizáljuk. így az N-propionil-dezmetilmuramil-L-aianil-D-glutaminsav-a-metilésztert (0,68 mól kristályvíz tartalmú) nyerjük, színtelen liofilizátum alakjában. [cv]p° = +14,9°±0,1° (c = 1,067; metanolban), Rf = 0,78 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0,57 (etilacetát-n-butanol-piridin-ecetsav-víz 42:21:21:6 ; 10 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 20,7 g (32,46 mmól) 4,6-0-izopropilidén-N-propionil - dezmetilmuramil- L -alanil - D - glutaminsav - (Ca)metilészter-(C7)-benzilésztcrt keverünk 400 ml 60 %-os ecetsavban 21 órán át, szobahőmérsékleten, majd vákuumban, 30 °C-on bepároljuk. Az így keletkezett maradékot háromszor keverjük össze 100-100 ml vízzel, majd ismételten bepároljuk. A nyersterméket végül oszlopkromatografálással tisztítjuk. Az oszlop 1000 g szilikagclt („60 rcinst”, Merck 0,063-0,200 mm) tartalmaz, elnálós/etkéiit mctilénklorid-mclanol, 85:15 arányú elegyet használunk, és 15 ml-es frakciókat fogunk fel. A 207-290 frakciókat egyesítjük és vákuumban, 30 °C-on bepároljuk. így az N-propionil-dezmetiJmuramil-L-alanil-D-glutaminsav-(C0.)-metilészter-(C7)-benzilésztert nyerjük, mely 0,24 mól kristályvizet tartalmaz. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
