191371. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új muramil-peptid-származékok és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 191 371 2 és propilparabcnt a víz nagyobb részében forrón oldjuk. Körülbelül 80 °C-on dolgozzuk bele a vizes fázist a zsírfázisba. A maradék vízben oldjuk a hatóanyagot és körülbelül 40 °C-on adjuk az előállított kenőcsalaphoz. 10. példa Ajaksí ift Összetétel N-acetil-muramil-N-meti!-L-alanil-D-glutamil-(Ca )-nbutilcsztcr-(C7)-L-alani»-2-(l,2-dipalmitoil-sn-gliccro-3- hidroxi-foszforil-oxi)-etilamid-nátriumsó (IX vegyükt) l,00g Átlag 400 molckulasúlyú polietilén-glikol 15,00 g Átlag 1000 molekulasúlyú polietilén-glikol 83,00 g Átlag 4000 molckulasúlyú polietilén-glikol 1,00 g Előállítás A hatóanyagot a polietilén-glikolok olvadékában finoman eloszlatjuk. A sűrűnfolyó olvadékot egy megfelelő ceruzahüvelybe töltjük és hagyjuk megdermedni. 11. példa 3,50 g (6, 9 mm ól) N-aceül-muramil-L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-metilésztert és 1,20 g N-hidroxi-szukcinimidet oldunk 50 ml 1:3:6 v/v arányú dimetil-formamidizopropanol-kloroform elegyben, 2,10 g (10,35 mmól) diciklohcxil-karbodiimidet adunk hozzá, majd a nedvesség kizárása mellett egy órán át keverjük szobahőmérsékleten. A szuszpenzióhoz50 mlctilacetátot adunk. 30 percen át keverjük jéggel történő hűtés közben, majd az oldhatatlan diciklo-hexil-karbamidot szűrjük. A szűrletet forgóbepárolón körülbelül 40 ml térfogatúra pároljuk be, az aktív észtert 150 ml vízmentes dietiléter hozzáadásával csapjuk ki (kétszer), ezután szűrjük, szárítjuk. Így az N-szukcinimiddel alkotott észter 5,1 g-ját nyejiik, mely kloroform-metanol-víz 70:30:5 rendszerben 0,43 Rf értéket mutat (nyerstermék). 3,43 g (4,4 mmól) L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil-snglicero-3-hidroxi-foszforil-oxi)-etilamidot szuszpendálunk 45 ml kloroformban és 40 °C 0,86 ml (6,1 mmól) trietil-amin 5 ml kloroformmal készített oldatát csepegtetjük hozzá 5 perc alatt. Eközben tiszta oldatot nyerünk. Ezután erős keverés közben a fenti aktívészter 100 ml 1:14:6 If/lf arányú dimctil-formamid-kloroformdioxán clcggyel készített oldatát csepegtetjük hozzá, 5 perc alatt a nedvesség kizárása mellett. A reakcióelegyet 2 és fél órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd az enyhén zavaros oldatot forgóbepárolón 30 °C- on szárazra pároljuk. A nyersterméket szilikagclen („60 reinst”, Merck, szemcsenagyság 0,07-0,2 mm, ASTM) kloroform-metanol-víz 70:30:5 rendszerben (5 ml-es frakciók) tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat (DC) összegyűjtjük. Az oldószer lepárlása után a maradékot 250 ml kétszer desztillált vízben oldjuk és az 1. példában leírtakhoz hasonlóan dialízissel (AMICON-keverőcella, 402 típus, ultraszűrő PM 30/76 mm <j>) tisztítjuk. A cellában visszamaradt oldatot Millipore-szűrőn (0,2 p) át szűrjük és liofilizáljuk. így az N-acetil-muramil-kala-. nil-D-glutamil-(Ca)-metilészter-(C7)-L-alanin-2-(l,2-dipalmitoil - sn - glicero - 3 • hidroxi - foszforil - oxi) - etilainid-nátriumsó 3,1 g-ját kapjuk (az elméleti hozam 55 7c-a), mely 2,96 mól kristályvizet tartalmaz. A termék színtelen por alakú anyag. talp0 = + ! 1°±1° (c =0,285; 10 %-os ecetsavban) Rf = 0,25 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben) és Rf = 0.39 (etilacetát-n-butanol-piridin-ecetsav-víz, 42 :21:21 :6:10 rendszerben). A kiindulási anyagot a következőképpen állítjuk elő: 7,7 g (21,2 mmól) L-alanil-D-glutaminsav-(Ca)-metilészler-(C7)-benzilcszter-hidroklorid és 8,96 g (23,3 mmól) N-acetil-4,6-0-izopropilidén-muramilsav-nátriumsót kapcsolunk az 1. példában leírtakhoz hasonlóan a diciklohexil-karbodiimid-N-hidroxi-szukcinimid módszerrel. A nyersterméket tisztítás nélkül hasítjuk 100 ml 60 %-os ecetsavban. Az oldatot 5 és fél órán át keverjük szobahőmérsékleten, majd erősen bepároljuk, a maradékhoz vizet adunk, majd ismét bepároljuk, végül 100 ml dioxán hozzáadása után liofilizáljuk. A maradékot 600 g szilikagclen (60 jelű) kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben (7 ml-es frakciók) tisztítjuk (kétszer). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert lepároljuk. így az N-acetil-muramil-L-alanil-D- glutaminsav-(Ca)-metílészter-(C7)-benzilésztert nyerjük színtelen habalakú anyag formájában. Rf = 0,63 (kloroform-metanol-víz, 7:30:5 rendszerben). 6,0 g (10 mmól) N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutaminsav^C^-metilészter-ÍC^-benzilésztert 95:5 v/v arányú 1,2-dimetoxi-etán-víz elegyben oldjuk és 0,6 g palládium-szén katalizátor (10 %-os) hozzáadása után normál nyomáson hidrogénezzük, másfél órán át. Aktalizátort kiszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson szobahőmérsékleten bepároljuk. A maradékot 400 g 60 jelű szilikagélen, 70:30:5 arányú kloroform-metanolvíz rendszerben (10 ml-es frakciók) a fent leírtak szerint tisztítjuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és az oldószert lepároljuk. A részben nátriumsó alakjában jelenlevő terméket az 1. példában leírtak szerint 50 ml DOWEX 50 W X 8 (50/100 mesh, H-ciklusú, erősen savas kationcseiélő) jelű ioncserélőn sómentesítjük. A szűrletet Millipore-szűrőn (0,45 p) szűrjük át és liofilizáljuk. így' az N-acetil-muramil-L-alanil-D-glutaminsav(CaVmetilésztert kapjuk (1,27 mól kristályvizet tartalmaz) színtelen por alakú anyag formájában. Iq]d° = +47°±1° (c = 1,249, metanolban) Rf = 0,08 (kloroform-metanol-víz, 70:30:5 rendszerben), Rf = 0,30 (acctonitril-víz, 3:1 rendszerben) és Rf = 0,43 (ecetsav-etilészter-ecetsav-víz-metanol, 67:10:23:12 rendszerben). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
