191292. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribavirin előállítására
17 191 292 18 hőmérsékleten 24 óra hosszat tenyésztjük. A tenyésztés után a sejteket elkülönítjük, és annyi vizet adunk hozzá, hogy 2,5 ml-es sejtszuszpe.nziókat kapjunk. Mindegyik 2,5 ml-es sejtszuszpenzióhoz 2,5 ml 3. példa szerinti reakciószubsztrát-oldatot adunk, és a tenyésztést 20 óra alatt különböző hőmérsékleten (5. táblázat) folytatjuk le. Analízis szerint, a ribavirin kitermelését az 5. táblázat mutatja. A fizikai adatok azonosak az 1. példánál megadottakkal. elválasztjuk. Az elválasztott sejtekhez 10 ml vizet adunk, és a kapott elegyet használjuk a következő reakcióhoz. Eképpcn, az előbbi reakciót azonos módon tízszer megismételjük. Az első reakció kitermelését 100-nak véve, az illető reakció ehhez viszonyított ribavirin kitermelését a 7. táblázat mutatja. 7. táblázat 5. táblázat Ribavirin Reakció ismétlése relativ Reakcióhőmérséklet (°C) Ribavirin kitermelése 15 kitermelése (%) 1 100,00 2 96,33 28 6,1 20 4 94,37 37 27,3 6 88,10 45 48.0 8 88,02 50 59,6 10 88,00 55 71,4 60 65 81,1 82,8 25 70 33,8 7. példa 5. példa Az 1. példa szerinti mikroorganizmus-törzs alkalmazásával a 4. példában megadott módon 2,5 ml-es sejtszuszpenziókal készítünk. Mindegyik szuszpenzióhoz 2,5 - 2,5 ml alábbi (A) vagy (B) rcakciószubszlrát-oldatot adunk, és a reakciót 20 óra alatt 60 °C hőmérsékleten folytatjuk le. Analízis szerint, a ribavirin kitermelését a 6. táblázat mutatja. A fizikai adatok azonosak az 1. példánál megadottakkal. (A) rcakciószubsztrál-oldat: 20 mmól 1,2,4-triazol-3-karbaxamid és 20 mmól inozin; (B) reakciószubsztrát-oldat: az előbbi (A) reakciószubsztrátumot azonos mennyiségeihez 25 ml monokálium-dihidrogén-foszfátot adunk. 6. táblázat Reakciószubsztrát-oldat Ribavirin kitermelés (%) (A) 69,00 (B) 72,76 1 liter 2 %-os húsleves tápközeget az 1. példa szerin- 2Q ti mikroorganizmus-törzzsel beoltjuk, és rázással 22 óra hosszat 30 °C hőmérsékleten tenyésztjük, majd a tenyésztett terméket centrifugáljuk. Ilyen módon intakt mikrobás sejteket kapunk. A mikrobás sejtekhez 20 ml A folyadékot [24 ml 1 35 N sósav, 3.425 g triszés 0,23 ml TEMED (N,N,N',N'letrainetü-etilén-diamin) oldásával és vízzel és 100 ml-re való hígításával készítjük], 20 ml B folyadékot [vizes oldat, 30 g akrilamid és 0,8 g BIS [N,N-meti|énbisz(akrilamid)] oldásával és vízzel 100 ml-re való 4P hígításával készítjük], és 40 ml C folyadékot (vizes oldat, 0,3 g ammónium-perszulfát oldásával és vízzel 200 ml-re való hígításával készítjük) adunk, és az elegyet a sejtek rögzítésére állni hagyjuk. A rögzítés után, a terméket homogenizátor segítségével eloszlatjuk, így 180 ml rögzített mikrobás sejteket kapunk. ’ 10 ml rögzített mikrobás sejtekhez 20 ml reakciószubszlrát-oldatot (pH = 7,0) adunk, mely 20 mmól l,2,4-triazol-3-karboxamidot, 20 mmól inozint és 25 mmól monokálium-dihidrogén-foszfátot tartalmaz, és a reakciót 24 óra alatt 60 °C hőmérsékleten lefolytatjuk. A reakcióelegy elemzése 62,89 % ribavirinképződést mutat. Ha a reakciót azonos körülmények között intakt mikrobás sejtek alkalmazásával folytatjuk le, akkora ribavirin kitermelése65,48 %. A fizikai 55 adatok azonosak az 1. példánál megadottakkal. 6. példa 60 Az 5. példa szerinti 2,5 ml mjkrobás sejtszuszpenzióhoz az 5. példa szerinti 2,5 ml (B) reakciószubsztrát-oldatot adunk és a reakciót 20 óra alatt 60 °C hőmérsékleten lefolytatjuk, majd a mikrobás sejteket 65 8. példa A 8. táblázatban megadott mikroorganizmustörzsek mindegyikét az 1. példa szerinti 50-50 ml húsleves táptalajba oltjuk, és rázással 24 óra hosszat 28 °C hőmérsékleten tenyésztjük, majd a sejteket centrifugáljuk, és ezután a sejtekhez sterilizált vizet adunk, hogy 5 ml-es sejtszüszpenziókat kapjunk. 10
