191292. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribavirin előállítására
19 191 292 20 9. táblázat folytatása Mindegyik 5 ml-es mikrobás sejtszuszpenziós 5 ml vizes oldatot (pH = 7,0) adunk, mely 20 mmól 1,2,4- triazol-3-karboxamidot, 20 mmól inozint és 25 mmól monokálium-dihidrogén-foszfátot tartalmaz, és a reakciót 24 óra alatt 60 °C hőmérsékleten lefolytatjuk. A reakció befejezése után a ribavirin kitermelését analízissel meghatározzuk. Az eredményeket a 8, táblázat mutatja. A kapott termék fizikai állandót mindegyik esetben megegyeznek az I. példában megadottakkal. 8. táblázat Ribavirin Mikroorganizmus-törzs kitermelés (%) Brevibacterium imperiale ATCC 8365 21,55 Corynebacterium equi IÁM 1038 35,17 Bacillus subtilis ATCC 14 593 10,64 Micrococcus variáns IFO 3763 26,56 Arthrobacter citreus IFO 12 957 11,97 Arthrobacter globiformis IFO 12 137 8,32 Micrococcus luteus ATCC 4698 21,77 Micrococcus roseus IFO 3768 11,18 Bacillus cereus IÁM 1029 3,30 9. példa A 9. táblázatban megadott mikroorganizmustörzsek mindegyikét porított húsleves 50-50 ml vizes oldatába oltjuk, és 24 óra hosszat 28 °C hőmérsékleten végzett rázótenyésztés után a sejteket centrifugáljuk. A sejtekhez sterilizált vizet adunk, hogy 5 ml-es sejtszuszpenziókat kapjunk. Ezen 5 ml-es sejtszuszpenziók mindegyikéhez 5-5 ml vizes oldatot (pH = 7,0) adunk, mely 20 mmól 1,2,4-triazol-3-karboxamidot, 20 mmól inozint és 25 mmól monokálium-dihidrogén-foszfátot tartalmaz, és a reakciót 20 óra alatt 60 ”C hőmérsékleten lefolytatjuk. A reakció befejezése után a sejteket centrifugáljuk, és a ribavirin kitermelését analízissel meghatározzuk. Az eredményeket a 9. táblázat mutatja. A kapott termék fizikai állandói mindegyik esetben meg egyeznek az 1. példában megadottakkal. 9. táblázat Mikroorganizmustörzsek Ribavirin kitermelés (%) Flavobacterium arborescence IFO 3750 25,54 Flavobacterium lutescens IFO 3084 76,26 Flavobacterium lutescens IFO 3085 7,45 Microbacterium thermosphacturo IFO 12 167 9,00 Mikroorganizmustörzsek Ribavirin kitermelés (%) Xanthomonas oryzae IFO 3312 69,25 álteromonas putrefaceiens ATCC 3071 11,68 Alteromonas putrefaceiens ATCC 3072 47,35 ■Mtcromonas putrefaceiens ATCC 3073 21,14 Pseudomonas schuylkilliensis IAM 1051 10,50 Pseudomonas ovális IAM 1022 11,11 Pseudomonas dacunhae IAM 1089 7,98 Achromobacter parvulus IFO 13 182 27,84 \chromobacter xerosis IFO 12 668 51,84 Escherichia coli IFO 3301 7,37 Escherichia coli 1AM 1268 61,47 Aerobacter aerogenes 1AM 1019 (FERM P-6538) 12,18 Staphylococcus aureus IAM 1011 18,61 Staphylococcus aureus IFO 3060 18,25 Sarcina marginal» IAM 1130 (FERM P-6539) 14,04 Bacterium suceinicum IAM 1017 (FERM P-6540) 16,74 Serratia marcesccns IAM 1105 8,32 Proteus vulgaris IAM 1025 11,88 Cellulomonas flavigena IFO 3753 12,75 Cellulomonas flavigena IFO 12 680 22,10 Enterobacter aerogenes IFO 12 010 10,53 Enterobacter cloacae ATCC 7256 12,18 Mycoplana bullata IFO 13 290 10,38 Vibrio anguillarum IFO 13 266 12,71 Erwinia carotovora subsp. carotovora IFO 12 280 11,98 Klebsiella pneumoniae ATCC 8308 9,39 Aeromonas hydrophila subsp. hnaerogenes IFO 13 282 16,16 Mycotorula japonica OUT 6226 33,37 Candida polymorpha IFO 0836 (FERM P-6541) 23,15 10. példa Pseudomonas putrefacciens ATCC 8072 törzset a 9. példa szerint tenyésztjük (de mindegyik táptalaj 10 ml), tenyésztés után a sejteket centrifugáljuk, és mindegyikhez 1 ml sterilizált víz hozzáadásával sejtszuszpenziókat készítünk. Mindegyik sejtszuszpenzióhoz 1-1 ml vizes oldatot (pH = 7,0) adunk, mely 20 minő! l,2,4-triazol-3- karboxamidot, 20 ml 10. táblázatban megadott különböző ríbóz donort és 25 mmól monokálium-dihidrogén-foszfátot tartalmaz, és a reakciót 20 óra alatt 60 °C hőmérsékleten lefolytatjuk. A reakció befejezése után a mikrobás sejteket centrifugálással eltávolítjuk, és a felső folyadékfázist analizáljuk. Ribavirin kiter5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
