191292. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ribavirin előállítására
5 191 292 6 (21-t) Vibrio anguillarum IFO 13 266 (ATCC 19 264) (22— 1) Erwinia carotovora subsp. carotovora IFO 12 380 (23- 1) Klebsiella pneumoniae ATCC 8308 (24— 1) Aeromonas hydrophila subsp. anaerogenes IFO 13 282 (ATCC 15 647) (25-1) Mycotorula japonica OUT 6226 (26- 1) Candida polymorpha IFO 0836 Ezt a mikroorganizmus-törzset a FERM-nél 1982. május 24-én FERM P — 6541 letéti szám alatt helyeztük letétbe. Az előbbi mikroorganizmus-törzsek letéti számaiban az ATCC a The American Type Culture Collection, 12 301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland, USA letéti számait jelenti: az IFO a Foundation Institute for Fermentation, Osaka, 17-85, Juso-honmachi 2-chome, Yodoga\va-ku, Osaka, Japán, letéti számait jelenti ; az IÁM az Institute of Applied Microbiology, University of Tokyo, Yayoi 1 — 1 — 1, Bunkyoku, Tokyo, Japán, letéti számait jelenti; illetve az OUT a Faculty of Engineering, Osaka University, Yamada ue, Suita, Japáp, letéti számait jelenti. Az ATTC számmal rendelkező törzsek az American Type Culture Collection, Catalogue of Strains 1, XV. kiadás, 1982, katalógusba^ felsorolt törzstenyészetek. Az IFO, OUT és IÁM számmal rendelkező törzset a JFCC Catalogue of cultyres-ben, III. kiadás, 1979, vagy az Institute for Fermentation Osaka, List of Cultures, VI. kiadás, 1978, katalógusban felsorolt törzstenyészetek. A nemzetségek és a fajok nevei, melyekhez ezek a mikroorganizmusok mint törzskultúrák tartoznak, a taxonómiai standardok változása miatt megváltozhatnak, azonban ezek a mikroorganizmustörzsek azonosnak tekinthetők az előbb példaként megadottakkal, amennyiben ezek azonos vagy egyenértékű bakteriológiai tulajdonságokkal rendelkeznek. ' Az' előbbi mikroorganizmusokból származó mutáns törzsek, vagyis mutagén módszerekkel, általában fizikai kezeléssel, mint UV-sugárral, X-sugárral vagy y-sugárral, vagy más mutagénnel átalakított mutáns törzsek, vagy természetes okoknak tulajdonítható természetes mutációk a jelgn találmányban szintén felhasználhatók, amennyiben a ribavirin termelésében közreműködő enzimatikus aktivitásukat nem vesztik el. A különböző mikroorganizmusok közül legelőnyösebb törzs a Brevibacterium acetylicum AT-6-7, melyet Koshien baseball pálya talajából izoláltunk, Nishinomiya-shi, Hyogo-ken, Japán. Ez a törzs a következő bakteriológiai tulajdonságokkal rendelkezik: A) Morfológia (1) A sejtek alakja és mérete: rövid pálcika alakú, 0,8- 1,0 x 1,0- 1,2 pm; (2) Spóraképződés nincs (3) Gram-színezés: pozitív B) Tenyésztés különböző tápközegben (1) Húsleves-agar lemezkultúra (28 °C, 48 óra) 1. Kolónia formája: kör alakú 2. Kolónia felülete: lapos, sima 3. Méret: 2 — 4 mm 4. Színárnyalat: sárgától rózsaszínes sárgáig (2) Húsleves ferdetenyészet (28 "C, 48 óra) 1. Növekedés: jó 2. Növekedés formája: tüskés (3) Húsleves folyékony tenyészet (28 °C, 48 óra) Növekedés: a felületen gyürűképződés, gyenge üledékképződés (4) Húsleves-zselatin szúrt tenyészet (20 °C, 6 nap) Rétegesen elfolyósodik (5) Lakmusztcj tenyészközeg (28 CC, 4 nap) Enyhe koagulálás, peptonizálás is megfigyelhető C) Fiziológiai tulajdonságok (1) Nitrát redukciója (18 °C, 5 nap): redukálás nincs (2) Hidrogén-szulfid képződés (28 “C, 5 nap): nem képződik (3) Keményítő hidrolízise: hidrolizálható (4) Kataláz: pozitív (5) Indol-képződés: nem képződik (5) Peptonból es argininből ammóniafejlődés: negatív (7) Metilvörös teszt: negativ (8) V-P teszt: pozitív (9) Viselkedése az oxigénhez: aerob (10) O — F teszt (Hugh Leifson módszerrel): F típus (fermentáció) (11) Cukorból savképződés pozitív: glükóz, mannóz, fruktóz, maltóz, szacharóz, trehalóz, negatív: arabinóz, xilóz, galaktóz, laktóz, szorbit, inozit, glicerin. (12) Tenyésztés pH tartománya: PH 6,0-9,0 913) Optimális tenyésztési hőmérséklet: 25-37 °C Ezeket a bakterológiai tulajdonságokat a Bergcy’s Manual of Determinative Bacteriology, 7. kiadás (1957) szerinti taxonómiás standardokhoz viszonyítva vizsgáltuk. Ennek eredményeként, az AT-6-7 törzset, mely csaknem coccus formájú rövid pálcika alakú baktérium, nem képez szálakat, és szénhidrátokból savakat termel, a Brevibacterium nemzetséghez tartozó törzsként azonosítottuk, és mint Brevibacterium acetylicum AT — 6 — 1 jelöltük. Az előbbi mikroorganizmus-törzset, a Brevibacterium acetylicum AT —6 —7-et, Bergey’s Manual of Bacteriology, 7. kiadás szerint azonosítottuk, de lehetséges ezt, a taxonómiai standardokban levő némi változások miatt, különböző taxonómiai standardok szerint, más fajokhoz vagy nemzetségekhez sorolni. Azonban, az előbb megjelöli mikroorganizmusokat az előzőekben említett letétbe helyezések és bakteriológiai tulajdonságok alapján minden kétséget kizáróan meg lehet határozni. A Brevibacterium acetylicum AT —6—7 törzset FERM-nél 1982. január 13-án (FERM P-6305) helyeztük letétbe, és a törzset a FERM-től 1983. március 5 1P 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
