191108. lajstromszámú szabadalom • Eljárás M 9026 jelű antibiotikum-komplex komponensek előállítására
9 191 108 10 IV. táblázat Törzsek MIC pg/ml Staphylococcus aureus ATCC 6538 0,1 Staphylococcus aureus Tour 0,05 Staphylococcus aureus Tour (Difco P táptalaj + 30% borjú szérum) 12.5 Straptococcus tiacmolyticus C 203 0,2 Diplococcus pneumoniae UC41 0,4 Clostridium perfringens ISS 30543 12,5 Proteus vulgaris X 19 H ATCC 881 >100 Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145> 100 Candida albicans SKF 2270 100 Trichophyton metangrophytes SKF 17410 >100 Mycobacterium tub. H37Rv ATCC 9360 12,5 Mvcoplasma gallisepticum H 21 C.Z.B. 0,1 Trichomonas vaginalis 100 Az M 9026 antibiotikum komplex és 2., valamint 3. komponense citotoxikus hatással rendelkeznek in vitro és daganatgátló hatással rendelkeznek in vivo kísérletekben. In vitro kísérletek HL 60 sejtek szuszpenzióját 20 % borjú magzat szérummal, 50 pg/ml gentamicinnel és 2 mM L-glutaminnal kiegészített RPMI 1640 táptalajban tartjuk fent (S. J. Collins et al.; Nature, 270, 347 - 349, 1977) 37 °C-on 5 % széndioxiddal dúsított, nedvesített légkörben. A vizsgálni kívánt anyagokat 10 % metanolban oldjuk, majd steril sóoldatban 1000 £ig/ml végkoncentrációra hígítjuk. Az M 9026 komplex IC50 értéke (azaz a kontrolihoz képest a sejtek növekedését 50 %-ban gátló koncentráció) 0,1—0,25 íig/inl volt. Azonos körülmények között az M 9026 antibiotikum 2. jelű komponensének IC50 értéke 0,5-5 /ug/ml volt, az M 9026 3. jelű komponenséé körülbelül 0,05 jUg/ml. A sejtnövekedés gátlásának mértékéül a 311-t imitlin beépülés gállását használ luk. AclinoinyciH D és cikloheximid volt a pozitív kontroll. IC so értékük a fenti körülmények között körülbelül 0,05 pg/ml, illetve 0,25 /ug/ml volt. ln vivo kísérletek A találmány szerinti vegvületek daganat-ellenes hatására vonatkozó előzetes vizsgálatot P388 daganatos egereken végeztük. A kísérleteket lényegében a National Cancer Institute előiratai alapján végeztük (Geran és mtsai, Cancer Chem. Rep. III. rész, 3 17, 197). Ebben a vizsgálatban 10s daganalscjtct juttatunk inraperitonálisan CDFi egerekbe. A vizsgált anyagot karboximetil-cellulózban szuszpendáljuk, majd 24 órával a daganat beültetése után kezdődően, 1-5 napig tartó kezelés során naponta egyszer intraperitonáiisan beinjekciózzuk. A kontroll egerek nem kapnak hatóanyagot. A kezelt és kezeletlen egerek túlélési idejét feljegyezve, a kísérletekben kapott eredményeket a kontroll túlélési-idő százalékában fejezzük ki (T IC): Kezelt csoport átlagos túlélési ideje------------------------------------------------X 100 Kontroll csoport átlagos túlélési ideje A 100-nál nagyobb érték azt mutatja, hogy a kezelt csoport átlagos túlélési ideje a kontroll csoporthoz képest megnőtt. A vizsgálat eredményeinek értékelése során az NCI követelményei szerint a TjO 125 értéket mutató anyagokat tekintjük további tanulmányozásra érdemesnek. 5 mg/kg dózisban az M 9026 antibiotikum komplex T/C értéke 153 volt, míg az M 9026 3-as komponens T/C értéke 168 volt. Pozitív kontrollként 5-fluoro-uracilt használva 60 mg/kg dózisban Iö8-as T/C értéket kaptunk. A találmány szerinti eljárással előállított vegvületek mikroba- és daganat-ellenes hatással rendelkeznek. Ennélfogva ezek a vegvületek gvógyászatilag aktív anyagokként használhatók. Felhasználás céljából ezeket a hatóanyagokat a kezelésre szoruló betegek szájon át vagy parenterálisan történő kezelésére alkalmas, ismert gyógyászati keverékekbe keverjük. A szájon át történő adagolásra alkalmas készítmények lehetnek por, kapszula, tabletta, szirup stb. formában, általánosan elfogadott eljárásokkal és a szakterületen jól ismert hordozó- és adalékanyagokkal készülnek. A jelen esetben előnyösen alkalmazható parenterális adagolás céljára a találmány szerinti hatóanyagot felületaktív anyagok és más gvógyászatilag elfogadható töltőanyagok hozzáadásával vagy anélkül, fiziológiailag elfogadható hordozóban (például steril víz és/vagv olajok) készült injektálható oldat vagy szuszpenzió dózisok formájában adagoljuk. A felhasználható olajra jellemző példa a petróleum, állati vagy szintetikus eredetű, pl. tnogyoróolaj, szójaolaj, szezámolaj és ásványolaj. Általában kétszer desztillált, pirogén-mentes víz, sóoldat, vizes dextróz és rokon cukor-oldatok, etanol és glikolok, például propilén vagy polietilén-glikolok használhatók injek(álhaló oldatok folyékony hordozójaként. Ezeket a készítményeket használatra kész oldatok formájában, vagy előnyösen a száraz oldható terméket az oldószerrel csak közvetlenül használat előtt elegyítő formában használhatjuk. Ez utóbbi esetben az aktív komponens általában liofilezve van. Parenterális adagolás esetén a gvógyászatilag hatásos napi adag 0,5—20 mg/testtömeg-kilogramm között van. A hatóanyagok napi többszöri adagolása kívánatos lehet és változik a beteg állapotával és az adagolás módjával. A hatóanyagokat adagolhatjuk nyújtott hatású injekció vagy beültetett preparátum formájában, mely lehetővé teszi az aktív adalékanyag állandó, egyenletes felszabadulását. Az aktív adalékanyagot tablet5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
