191108. lajstromszámú szabadalom • Eljárás M 9026 jelű antibiotikum-komplex komponensek előállítására
3 191 108 4 A színek meghatározását Maerz és Paul módszerével végeztük (Maerz, A. and M. Reg. Paul 1950. A dictionary of colors 2ml Ed., Mc Grow-Ilill Book Company, Inc. New York). A táptalajok száma, ha jeleztük, megfelel a Shirling és Gottlieb által leírtnak (Intern. J. Svst. Bact. 16 313-340, 1966). A II. táblázatban a Luedemann által leírt táptalajon (Inicr. .1. Sysl. Bact. 21. 240 247, 1971) meghatározott s/.£nforrás hasznosítást mutatjuk be, míg a III. táblázatban a Micromonospora sp. NRRL 15 118 fiziológiai jellemzőit. II. táblázat Különböző szénforrások hasznosítása Szénforrás Hasznosítás Arabínóz + Xilóz 1 Glükóz + Fruktóz + Mannóz + Mannit — Inozit — Ramnóz — Szacharóz-f Laktóz + Raffinóz + Cellulóz — Szalicin — Melibóz 4-Galaktóz- + Ribóz — Dulcit — Glicerin — Cellobióz + Trehalóz-f Oldható keményítő + hasznosítás — nincs hasznosítás ± gyenge hasznosítás fii. táblázat Fiziológiai tulajdonságok Vizsgálat Eredmény Keményítő hidrolízis pozitív Kénhidrogén-fejlesztés pozitív Melanin termelés negatív Tirozináz reakció negatív Kazein hidrolízis pozitív Kalcium-malát hidrolízis negatív Nitrát-redukció pozitív Lakmusz tej koagulálja Zselatin elfolyósítás pozitív Más szervezetekhez hasonlóan az M 9026 antibiotikumot termelő Micromonospora sp. NRRL 15 118 törzs tulajdonságai változhatnak. A törzsből például mesterséges mutánsok és variánsok állíthatók elő különböző ismert mutagénncl történő kezeléssel, például UV sugarakkal, Röntgen-sugarakkal, mikrohullámmal, radioaktív sugarakkal és vegyszerekkel, például salétromos savval, N-metil-N'-nitro-N-nitrozoguanidinncl és számos más anyaggal. Micromonospora sp. NRRL 15 118 törzs összes M 9026 antibiotikumokat termelő természetes és mesterséges variánsát és mutánsát a Micromonospora sp. NRRL 15 118 törzzsel azonosnak tekintjük és a találmány körébe tartozónak gondoljuk. Az M 9026 antibiotikumok előállítására a Micromonospora sp. NRRL 15 118 törzset vagy ennek egy megfelelő mutánsát vagy variánsát hasznosítható szénforrást, nitrogént és szervetlen sókat tartalmazó vizes tápoldatban süllyeszteít-levegőztetett körülmények között tenyésztjük. Az említett tenyésztő közeg a fermentációs szakmában általában használt számos táptalaj bármelyike lehet, bár bizonyos tenyésztő közegek előnyösebbek lehetnek. Így például előnyösen használható szénforrás a glükóz, keményítő, maltóz, szacharóz, galaktóz, cellobióz, raffinóz, fruktóz, dextrin, melasz és hasonlók. Más, használható szénforrás lehet a mogyoróolaj, kukorica-olaj, szójaolaj, halolaj és hasonlók. Az előnyösen használható nitrogén-források közé tartoznak az élesztő-kivonatok, aminosavak, kazeín-hidrolizátum, hűskivonat, szójaliszt, peptonok és hasonlók. Más használható nitrogén-forrás lehet a zabliszt, mogyoróliszt, szójaliszt, szójadara, gyapotmag-liszt és hasonlók. A tény észlében használható szervetlen sók azok a szokásos oldható sók lehetnek, amelyekből nátrium, kálium, vas, cink, kobalt, magnézium, kalcium, ammonium, klorid, karbonát, szulfát, nitrát, foszfát és hasonló ionok keletkeznek. A baktérium növekedéséhez és fejlődéséhez szükséges nyomelemeket is beletehetjük a tenyészlébe. Ezek a nyomelemek általában a baktérium növekedési igényeit kielégítő mennyiségben fordulnak elő szennyező anyagként a tenyészlé többi komponensében. Szükséges lehet, hogy kismennyiségíí (pl. 0,2 ml/1) habgátló anyagot, például polipropilén-glikolt vagy szilikon-származékot adjunk nagy térfogatú fermentációkhoz, ha a habzás nehézséget okoz. Nagyobb mennyiségű M 9026 antibiotikumok előállítása során az antibiotikumot termelő törzset rendszerint rázott lombikban előtenyésztjük, majd ezt a tenyészetet használjuk üveg fermentorok oltására. Az előtenyésztéshez használt táptalaj lehet azonos a termelő-táptalajjal, de más táptalaj is használható. Az M 9026-ot termelő törzs nő 25 °C és 37 °C között, előnyösen alkalmazhatjuk a 26 °C és 30 °C közötti hőmérséklet-tartományt. A fermentlé pH-ját általában 6,0 és 8,5 között kell tartani. Az üvegfermentorokat használó süllyesztett-levegöztetett tenyésztési folyamatok során általánosan elfogadott eljárásként steril levegőt buborékoltatnak át a tenvészlén. Hogy a baktérium kielégítően növeked5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
