191085. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-(5'-ribonuleotid)-származékok előállítására
5 1 I 085 6 A frakció sorszáma Zóna (S. lutea) (mm) -E +E 150 15 21 160 15 21 170 15 21 180 15 21 190 15 21 200 15 21 A 12 80 sorszámú frakciókul egyesítjük, vizes olrlat i töményítjük, és liofilizáljuk. Így 12,22 g készítményhez jutunk, melynek jele ADA-34.1. Egy másik kísérletsorozatban 6 liter, 2 g „inaktivá ” U-57 930 anyagot tartalmazó fcrmcntlével kezelünk a fenti módon. Az Amberliter XAD-2 oszlopról távcíó metanolos eluátumot ADA-143B jelzéssel megőrizzük. Ezt az oldatot nem pároljuk be szárazra, hanem az alábbi 20 leírás szerint Dowex-1 kromatográfiával tisztítjuk. Dowex-1 kromatográfiai az oszlopot 300 ml Dowex-1 (X-4) acetát-formából készítjük. Az ADA-143B jelű metanolos oldatot, melynek pH értéke 8,2, átvezetjük az oszlopon, és az elfolyó folyadékot 2,5 ml/perc áram- 25 lási sebesség mellett 20 ml térfogatú frakciókban fogjuk fel (1-60 sorszámú frakciók). Ezután az oszlopot 1,5 liter vízzel átmossuk (áramlási sebesség 10 ml/perc, 66-108 sorszámú frakciók). Ezt követően az oszlopot 5%-os ecetsavval eluáljuk (10 ml/perc, 109—310 sor- 39 számú frakciók). A következő frakciókat egyesítjük: 1. gyűjtés 1- 80 frakciók 2. gyűjtés 81-110 frakciók 3. gyűjtés 111-130 frakciók 4. gyűjtés 131—150 frakciók 5. gyűjtés 151-190 frakciók 6. gyűjtés 191-230 frakciók 7. gyűjtés 231-270 frakciók 8. gyűjtés 271-310 frakciók 1000 ml (ADA-1A) 600 ml (ADA-2A) 450 ml (ADA-3A) 450 ml (ADA-4A) 35 900 ml (ADA-5A) 900 ml (ADA-6A) 900 mi (ADA-7A) 900 ml (ADA-8A) 4Q Az alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtti (—E) és utáni (+E) hatékonysági vizsgálat eredménye a következő: Zóna (S. lutea) (mm) 45-E + E 1. Gyűjtés 31 52 2. Gyűjtés 36 49 50 3. Gyűjtés 34 45 4. Gyűjtés 18 40 5. Gyűjtés 25 30 6. Gyűjtés 27 29 7. Gyűjtés 27 29 55 8. Gyűjtés 29 31 Az 1. és 2. gyűjtést egyesítjük, vizes oldattá töményítjük, majd liofilizáljuk. Így 1,48 g anyaghoz jutunk, melynek jele ADA-2.1 a 3. és 4. gyűjtést szintén egyesítjük, és hasonló módon kezeljük, így 2,5 g anyagot kapunk, melynek jele ADA-2.2. Alkálikus foszfatázzal kezelve az ADA-2.1 és ADA-2.2 készítmények U-57 930 vcgy.ülctet adnak. 65 Az ADA-34.1, ADA-2.1 és ADA-2.2 készítményeket egyesítjük, és az alább következő, kettős ellenáramú megoszlásos eljárással tisztítjuk. Kettős ellenáramú megoszlatás: az ADA-34.1, ADA-2.1 és ADA-2.2 készítmények egyesítésével nyert 16,20 g anyagot 1-butanol és víz 1:1 arányú elegyéből álló oldószerrendszer mindkét fázisának 25 ml-ében oldjuk. Az oldatokat egy üvegből készült kettős ellenáramú megoszlási berendezés (100 cső/25 ml/fázis) középső csöveibe öntjük. A megoszlást 150 átvitel után elemezzük a biológiai hatékonyság szempontjából, alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtt ( É) és után (+E). Az eredmények a következők: Zóna (S. lutea-ra Alsó kollektor érzékeny) (mm)-E + E 5 29 31 10 31 33 15 30 33 20 27 33 25 22 33 30 17 34 35 0 34 40 0 33,5 45 0 33 50 0 34 55 0 34 60 0 35 65 0 36 70 0 38 75 0 39 80 0 40 85 0 41 90 0 42 95 0 43 100 0 43,5 Zóna (S. lutea-Alsó gép érzékeny) (mm)-E +E 50 0 45 45 nyomnyi 46 40 15 47 35 17 47,5 30 17 47 25 18 47 20 17,5 48 15 17 48 10 16 48 5 15 50 0 nyomnyi 50 Felső géjf 5 nyomnyi 49 10 nyomnyi 48,5 15 nyomnyi .48 20 nyomnyi 48,5 25 nyomnyi 49 4
