191085. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-(5'-ribonuleotid)-származékok előállítására
7 191 08:5 8 Alsó kollektor Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (mm)-E +E 30 30 50 35 nyomnyi 51 40 15 52 45 16 53 50 21 54 Felső kollektor Zóna (S. lutea-ra érzékeny) (mm)-E +E 100 17,5 54 95 17 53,5 90 19 53,5 85 20 53,5 80 21 53,5 75 22 53,5 70 24 53,5 65 26 53,5 60 28 53,5 55 30 52,5 50 32,5 52 45 33 52 40 35 52 35 36 52 30 39 49 25 41 47 20 43 48 15 43 46 10 43 43 5 35 35 A következő gyűjtéseket végezzük (lásd alább). Mindegyik gyűjtést vizes oldattá töményitjük, majd a megfelelő készítménnyé liofilizáljuk. I. Gyűjtés: Alsó kollektor 1—50; II. Gyűjtés: Alsó kollektor 51—100; alsó gép 50—30; III. Gyűjtés: Alsó gép 29-0; felső gép 1—50; felső kollektor 100-30. A következő készítményeket kapjak: Az I. Gyűjtésből: ADA-47.1, 9,78 g A II. Gyűjtésből: ADA-47.2, 0,30 g A III. Gyűjtésből: ADA-47,3, 5,29 g Az ADA-47.2 és ADA-47.3 készítményeket egyesítjük, és az alábbi leírás szerint DEAE-Sephadex kromatográfia útján tisztítjuk. DEAE-Sephadex kromatográfia: 300 g DEAE-Sephadex (A-25) gyantát 1 órán át keverünk vízzel, majd 2 órán át 0,5N vizes nátrium-hidroxid-oldattal. Az ioncserélőt addig mossuk vízzel, amíg a pH körülbelül 7,5. Ezután az anyagot 2 órán át 0,5N vizes ccctsavval keverjük, vízzel közömbös pH eléréséig mossuk, utána az oszlopba öntjük, és 1 kg nyomással állandó magasságra tömörítjük. Az oszlopot utánmossuk 4 liter vízzel, 8 liter 0,1%-os vizes trisz(hidroximetil)-aminometán (a továbbiakban THAM) oldattal, továbbá 3 liter 0,03M THAM-acetát pufferral, melynek pH értéke 8,0 (ezt úgy készítjük, hogy 3,64 g THAM-t 800 ml vízbe oldunk, és a pH-t ecetsavval 8,0 értékre állítjuk, majd a térfogatát 1 literre kiegészítjük). Az ADA-47,2 és ADA-47,3 egyesítésével kapott kb. 5,50 g tömegű anyagot 20 ml 0.03M THAM-acctát-oldatban (pH 8,0) feloldjuk, és az oszlop tetejére öntjük. Az oszlopot ezután eluáljuk 0,3M 8,0 pH értékű THAM- ncetát pufferr oldattal. Az 1 — 186 frakciókat (kb. 20 ml) összegyűjtjük, ekkor az oszlop eluálását felfelé áramlással folytatjuk. Összegyűjtjük az A, B, C, D és E frakciókat (minden egyes frakció térfogata 1 liter). A biológiai aktivitás vizsgálata alkálikus foszfatázzal végzett kezelés előtt (—E) és után (+E) a következő eredményeket mutatja. Zóna (S. lutea-ra ...... , érzékeny) (mm) A frakció sorszama J _ _-E +E 3 0 0 6 0 0 9 0 0 12 0 0 15 0 0 18 0 0 21 0 0 24 0 0 27 0 0 30 0 0 33 0 0 36 38 39 39 43,5 44 42 36 36 45 23,5 23 48 15 16 51 0 0 54 0 0 57 0 0 60 0 0 63 0 0 66 0 0 69 15 16 72 17 20 75 21 26 78 23 27 81 23 30 84 23 29 87 22 24 90 21 23 93 21 24 96 22 26 99 21 35 102 22 44 105 23 51 108 22,5 54 111 22,5 52,5 114 22 52 117 22 54,5 120 20,5 56 123 20 56 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
