190989. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dioxanil-metil-piperidin-származékok előállítására
1 190 989 2 zó oldattal kezeljük. A vizsgálati vegyületeket előzőleg izotóniás sóoldatban vagy 1%-os tilóz-oldatban oldjuk fel. A vizsgálati oldatot intraperitoneálisan vagy orálisan adjuk be az állatoknak. 30 perccel az intraperitoneális vagy 60 perccel az orálisan kezelt állatoknak l,5mg/kg norepinefrint adunk intravénásán az egerek farok-vénájába. Ezt követően az állatokat 10-es csoportokban B méretű Perspex ketrecbe helyezzük ; az elpusztult állatok számát 24 órával a norepinefrin injekció beadása után ellenőrizzük. 15mg/kg dózisú, intravénásán beadott norepinefrin injekció (amely dózis az LD50 érték háromszorosa) 15 percen belül elpusztítja az összes kontroll állatot. A vizsgálati vegyülettel is kezelt állatok közül az életben maradiakat 24 óra eltelte után számoljuk meg. Az ED50 értéket Spearman-Kaerber módszerrel állapítjuk meg. Kataleptikus hatás vizsgálata patkányokon Wistar típusú 150-180 g súlyú patkányokat 4-es csoportokba osztunk. A vizsgálati anyagot az állatoknak orálisan adjuk be, a beadást követően 1, 2, 3, 4, 6 és 24 óra elteltével az állatokat 7 cm-rel a ketrec alja felett lévő korlátra helyezzük. A korlát 22 x 38 x 16 cm méretű ketrecben van elhelyezve. A kataleptikus hatást az alábbiak szerint értékeljük: a korláton eltöltött idő kataleptikus érték < 10 sec 0 10-20 sec 1 20-30 sec 2 > 30 sec 3 Az ellenőrzést 1, 2, 3, 4 és 6 óra eltelte után végezzük, és minden állatnál 2 perces időközben megismételjük. A 6 óra alatt mért értékeket összegezzük (a maximális érték, ami neuroleptikumek adagolása után mérhető 3x3x5 = 45). 4-6 órával a dózis beadása után is észlelhető a kataleptikus hatás. Az eredményt a maximálisan mért érték lírában adjuk meg. Az ED50 értéket lineáris regressziós analízis segítségével számítjuk ki. 5 3 H-spiroperidol-kötés vizsgálata Búrt és társai által leírt eljárással (Mol. Pharmacol 12, 800, 1976) borjú sejt-membrán frakciót pre- 10 parálunk és -40°C hőmérsékleten tárolunk. Ebből a készletből egy részt szobahőmérsékletre.felolvasztunk, 5 percig 37 °C hőmérsékleten inkubálunk, majd 10 percig 5Ö 000 • g fordulatszámmal 10 percig centrifugálunk. A csapadékot puflfer-oldat- 5 tál szuszpendáljuk (1 : 1000 hígításban). A szuszpenziót 1 nM (39 Ci/mmól) spiroperidollal inkubáljuk, majd 5 ml-es frakciókra osztjuk. Az 5 ml-es részleteket az alábbiak szerint inkubáljuk : 20 3 mintát 10 5 mól butaclamollal kezelüfk, a nem-specifikus kötések meghatározására, 3 mintát adalék hozzáadása nélkül az összes kötésre vonatkozóan vizsgálunk, 1-1 mintát a növekvő koncentrációjú, a vizsgálati anyagot tartalmazó oldattal kezelünk. Ezután a mintákat 3,0 ml jéghideg puffer-oldattal elegyítjük, szűrjük, mossuk (Skatron sejtszűrő és GF/F üvegszál alkalmazásával, a Life Sei. 24, 2293 1797-ben leírtak szerint). A szűrőt levegőn szárítjuk, majd 5 ml scintillator koktéllal elegyít- 30 jük. A mintákat 10 percig rázzuk, majd mérjük a minták kemolumineszcenciáját. A növekvő koncentrációjú oldatokban mért értékekből grafikus extrapolációval megállapítjuk az IC50 értékét az alábbi számítás alapján: K‘’1C“:1+ÍTm- . A Kd disszociációs konstans értékét 40 0 ,37-2,28 nM 3H-spiroperidol koncentráció értékeknél állapítjuk meg. Az összehasonlító vizsgálatok eredményét az 1. táblázat foglalja össze, összehasonlító anyagként az (A) és (B) képletű ismert vegyületeket alkal-45 máztuk. 1. táblázat (la) általános képletű vegyület biológiai vizsgálati eredménye) Pclda száma R6, R\ R8 R9, R'° Apomorfinhatás vizsgálata (egéren) EDS0 i.p. Amfetamintoxieitás vizsgálata (egéren) EDS0 i.p. Norepinefrintoxieitás vizsgálata (egéren) ED,0 i.p. Kataleptikus hatás vizsgálata MED p.o. (patkányon) (6 óra) 3H-Spiroperidol vizsgálat (patkányon) KI p (A) képletű ismert vegyület 4,5 5,5 10,2 * 40 0,9 (B) képletű ismert vegyület 2,0 20 7,6 40 0,08 1. H 5=C1 0,09 0,8 > 20 ~ 30 0,03 30. 7—F 5—Cl 0,14 p.o. 2,0 p.o. > 25 ~ 40 0,05 29. 6=F 5—Cl 0,20 3,0 > 20 ~ 10-16. H 5—F 0,017 0,27 > 10--17. H 5—OCH 3 0,001 0,17 p.o. > 10 ~ 1,0 0,15 4
