190949. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonadotropin hormont felszabadító hormon antagonista peptidek előállítására
1 190 949 2 gént egyszeresen helyettesítjük klór-, fluor-, jódvagy brómatommal vagy nitrocsoporttal, a klór és a fluor az előnyös helyettesítők. Pl. ha I-Tyr-t iktatunk be az 5. helyzetben, az I előnyösen a méta (vagyis 3.) helyzetben helyezkedik el. Amikor ß-DNAL van jelen az 1. helyzetben, egy hidrofil D- aminosav-gyök, mint pl. 4-NH2-D-Phe, 4-guanidino-D-Phe, D-His, D-Lys, D-Orn, D-Arg vagy DHar (homoarginin) lesz a 6. helyzetben. Amikor dehidro-Pro van jelen az 1. helyzetben, egy lipofil aminosav D-izomerje, pl. D-Trp, D-Phe, D-Leu, D-Ile, D-Nle, D-Tyr, D-Val, D-Ala, D-Ser (OtBu), ß-D-2NAL vagy (imBzl) D-His lesz előnyösen a 6. helyzetben. A helyettesítések a 4., 7., és 10. helyzetekben általában tetszőlegesnek tekinthetők. Mivel ezek a peptidek nagymértékben hatásosak az LH kibocsátásának gátlásában, ezeket gyakran nevezik GnRH antagonista peptideknek. A peptidek gátolják a nőstény emlősök ovulációját igen alacsony szinten beadva is proestrusban és nagyon hatásosak arra a célra is, hogy a megtermékenyített csírasejtek reszorpcióját idézze elő, ha közvetlenül a megtermékenyítés után adjuk be. Ezek a peptidek hatásosak a him emlősök fogamzásgátló kezelésében is. A találmány szerinti eljárással előállítható peptideket az (I) általános képlet szemlélteti : X-R,-R2-R3-R4-R5-R6-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 (I) A képletben X jelentése legfeljebb 4 szénatomos alkanoilcsoport, R, jelentése ß-D-2-NAL vagy dehidro-Pro, R2 jelentése 4-halogén-D-Phe, R3 jelentése D-Trp vagy ß-D-2NAL, R4 jelentése Ser vagy Om, Rs jelentése Tyr, 2-F-Phe, 3-F-Phe, 2-Cl-Phe, 3-Cl-Phe, 2-CHj-Phe, 3-CH3-Phe, 3-I-Tyr, R6 jelentése D-Trp, D-Arg, D-His, 4-gua-D-Phe, ß-D- 2NAL, azzal a feltétellel, hogy R3 jelentése csak akkor ß-D-2NAL és R4 jelentése csak akkor Orn, ha ezek együtt fordulnak elő, és ha R5 jelentése Tyr és Re jelentése ß-D-2NAL. A ß-D-NAL az alanin D-izomerjét jelenti, amely helyettesítve van naftil-csoporttal a ß-szönatomon, ezt lehet jelölni 3-D-NAL-nak is. Előnyösen D- 2NAL-t alkalmazunk, amely azt jelenti, hogy a ß-sz0natom a naftalinhoz a gyűrű-szerkezet 2. helyzeténél kapcsolódik, de a ß-D-lNAL is használható. Az AAL ß-amino-Ala-t jelent, és aBu jelentése a,y-diamino-vajsav, amely vegyületet, vagy az Om helyettesítheti a Ser-t a 4. helyzetben. Amikor a Ser-t ilyen módon helyettesítjük, előnyösen ß-D- 2NAL-t alkalmazunk a 3. és 6. helyzetekben és dehidro-Pro-t az 1. helyzetben. A jelen találmány szerinti peptideket lehet szintetizálni klasszikus,, /oldatban történő szintézissel vagy szilárd fázisú technikával, klór-metilezett gyantát, metilbenzhidrilamin-gyantát (MBHA); benzhidrilamin gyantát (BHA), vagy a szakterületen ismert egyéb gyantát alkalmazva. A szilárd fázisú szintézist olyan módon hajtjuk végre, hogy az aminosavakat lépésenként adjuk hozzá a lánchoz, ennek a módszernek részletes ismertetése megtalálható a 4 211 693 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. Oldallánc-védő csoportokat, amelyek a szakterületen szintén jól ismertek, előnyösen a Ser, Tyr és Arg gyökökhöz adunk, valamint bizonyos szubsztituensekhez, és esetleg lehet adni a Trp-hez is, mielőtt ezeket az aminosavakat hozzákapcsoljuk a lánchoz, amely a gyantán épül fel. Ilyen módszer eredményezi a teljesen védett peptid-gyanta intermediert. A találmány szerinti eljárással első lépésben tehát a (II) általános képlettel jellemezhető peptidgyanta intermediert állítunk elő: X1-R1-4-F-D-Phe-R3(X2)-R4(X3)-R5(X4)-R6(X5)-Leu-Arg(X5)-Pno-Gly-NH-[hordozógyanta] (II) X1 jelentése a hidrogénatom vagy a-aminocsoportot védő csoport, mégpedig a peptidkémiában ismert alkalmas védőcsoport, megegyezhet X jelentésével. Az X1 a-aminocsoportot védő csoportok a következők lehetnek: (1) acil-tipusú védőcsoportok, pl. formil- (For), trifluor-acetil-, ftalil-, p-toluolszulfonil- (Tos), benzoil- (Bz), benzolszulfonil-, o-nitro-fenil-szulfenil(Nps), tritil-szulfenil, o-nitro-fenoxi-acetil-, akrilil(Acr), klór-acetil-, acetil (Ac) és y-klór-butirilcsoport; (2) aromás uretán típusú védőcsoportok, pl. benzil-oxi-karbonil- (Z) és szubsztituált benzil-oxikarbonil-, mint pl. p-klór-benzil-oxi-karbonil(C1Z), p-nitro-benzil-oxi-karbonil-, p-bróm-benziloxi-karbonil- és p-metoxi-benzil-oxi-karbonilcsoportok ; (3) alifás uretán-típusú védőcsoportok, pl. tere, butil-oxi-karbonil- (Boc), diizopropil-metoxikarbonil-, izopropil-oxi-karbonil-, etoxi-karbonil- és allil-oxi-karbonil-csoportok ; (4) cikloalkil-uretán típusú védőcsoportok, mint pl. ciklopentil-oxi-karbonil-, adamantil-oxi-karbonil- és ciklohexiloxi-karbonil-csoportok ; (5) tiouretán típusú védőcsoportok mint pl. feniltio-karbonil-csoport ; (6) alkil-típusú védőcsoportok, mint pl. allil(Aly), trifenil-metil- (tritil) és benzil (Bzl) csoportok; (7) trialkil-szilán csoportok, mint pl. trimetilszilán. Az előnyös a-amino-védő csoport, amikor X jelentése hidrogénatom, a Boc. X2 jelentése hidrogénatom vagy az indol nitrogénjét védő csoport, pl. formil vagy benzil-csoport; legtöbb szintézisben azonban nem szükséges védeni, a Trp-t. X3 jelentése hidrogénatom vagy a Ser alkoholos hidroxil-csoportját védő csoport, amelyet a következő csoportok közül lehet kiválasztani: acetil-, benzoil-, tetrahidro-piranil-, tere-, butil-, tritil-, benzil- és 2,6 diklór-benzil-csoport, ezek közül a benzil az előnyös csoport. Egy alternatívaként: amikor a Ser helyettesítése történt meg, az X3 lehet védőcsoportja az oldallánc aminocsoportjának, ilyen lehet pl. a Tos, Z vagy C1Z. X4 jelentése hidrogénatom vagy a Tyr fenolos hidroxilcsoportját védő csoport, (ha van jelen Tyr), amelyek a következő csoportok közül választhatók ki : tetrahidro-piranil-, terc-butil-, tritil-, benzil-, Z, 4-bróm-benzil-oxi-karbonil- és 2,6-diklór-benzilcsoport. Az előnyös csoport a 2,6-diklór-benzilcsoport. X5 a guanidino-csoport oldalláncát védő csoportnak vagy az Arg, Lys, Hys és hasonlók imid-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
