190751. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mixotfóf szövettenyészetek és herbicidrezisztens növények előállítására
0 *0.48±0.13 0.2l±0.06 10-« 0.14±0.04 0.18±0.04 io-s 0.14±0.03 0.27±0.07 ío-« 0.15±0.04 0.23+0.07 Szacharóz-Terbutrinkonc. (M) koncentráció = 3% A kalluszok fényben friss súlya lg) sötétben 0 *0.89±0.25 0.87±0.23 10-« *1.06+0.17 0.86+0.26 10-* *0.93±0.22 1.0910.26 10*« *0.88i0.32 0.82+0.15 A *-gal jelölt kalluszok zöldek voltak. A táblázat adataiból látható, hogy 3% szacharóz-koncentrációjú táptalajon, fényben vizsgálva, illetve sötétben a terbutrin hatástalan volt. Fényben, 0,3% szacharóz-koncentrációjú táptalajon viszont a herbicid már 10** M koncentrációban is lecsökkentette a növekedést, pontosan olyan szintre, mintha a kalluszok sötétben nőttek volna. Ez a hatás magasabb koncentrációnál már nem lett erősebb. Külön ki kell emelni, hogy a 0,3X szacharóz-koncentrációjú táptalajon nőtt kalluszok a herbicid kezelés hatására kifehéredtek, bizonyítva, hogy a kalluszokban működő fotoszintetikus elektrontranszport lánc volt, szemben a 3% szacharóz-koncentrációjú táptalajon kapott eredményekkel. 4. példa Mindenben a 3. példa szerint eljárva, de a herbicid kezelést a következő herbicidekkel végezve teljesen analóg eredményeket kaptunk: atrazin prometrín, aziprotrin, metribuzin, diuron, klórbromuron, metabenztiazuron, linuron, monolinuron, lenacil, terbacil, bromoxinil. Ugyancsak hasonló eredményeket kaptunk, ha a kísérletet Nicotiana plumbaginifolia helyett Nicotiana tabacum, Solanum nigrum vagy Solanum tuberosum fajokon hajtottuk végre. 5. példa Fo lösz in téziagé Uó hcrbicidekro rczitrzlcns növények előállítása Steril Nicotiana plumbaginifolia növények 1 g-nyi levelét körülbelül 1 mm-es szeletekre vágtuk, majd 10 ml szűréssel sterilizált enzim-oldatban inkubáltuk sötétben, 25 ®C hőmérsékleten, rázatás nélkül. Az inkubálés időtartama 18 óra volt. Az enzim összetétele: 0,5% driselase 0,4 M szachurózt tartalmazó Ka oldatban, ahol a Ka táp-oldat a következő összetételű: Anyag Koncentráció (mg l'1) KNOa 2400 CaCb x 2HiO 880 NIhNOs 240 NaCl-KC1-MnSOí x HjO 10 HsBCb 3 ZnSO« x 7H20 2,3 NajMoO* x2HiO 0.24 CuSOi x 5HaO 0.025 CoCls x 6H2O 0.014 KI 0.75 MgSO# 120 NaHîPOi x 2HíO 156 (NH«)*S0« 130 Nikotinsav 1 Bg 1 Bi 10 2,4-D 0.1 Benziladenin 0.2 Naftilecetsav 1 D-xilóz 250 inozit 100 pH 5.8. Az inkubúlás után a szuszpenziót étszűrtük (63 pm0 nylon szűrő), centrifugáltuk (100 g, 3 perc). A protoplaBztokat, amelyek centrifugálás után a meniszkuszban úsznak, W-5 oldatban felszuszpendáltuk. A W-5 mosóoldat összetétele: NaCl 9000 ing/1 Glükóz 1000 mg/1 CaOla x 2H20 18 400 mg/1 KC1 400 mg/1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
