190751. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mixotfóf szövettenyészetek és herbicidrezisztens növények előállítására
8 190751 9 1. táblázat Fénybon óh sötétben növesztett dohánykalluszok friss súlya különböző szacharóz-koncentrációjú táptalajokon Szacharózkoncentráció (X) A kalluszok fényben (1000 lx) friss súlya (g) sötétben 0.1 0.20±0.05 0.05±0.01 0.2 0.18±0.12 0.11 ±0.04 0.3 0.44 ±0.10 0.19±0.06 0.4 0.59±0.14 0.25±0.08 0.5 0.63±0.16 0.37±0.10 0.75 0.76±0.16 0.53±0.17 1.0 0.82±0.16 0.76±0.21 1.5 0.92±0.24 0.97 ±0.25 2.0 0.86±0.23 1.01 ±0.28 3.0 0.70±0.16 1.05±0.33 A táblázatban szereplő adatokbl látható, hogy 1,0% szacharóz-koncentráció felett a kalluszok növekedésének mértéke fényben és sötétben a hibahatáron belül azonos, tehát a növekedés heterotróf. Szacharózt nem tartalmazó táptalajon a kalluszok gyakorlatilag nem nőnek, ami azt jelzi, hogy autotróf növekedésre képtelenek. Alacsony, 1% alatti, előnyösen 0,2-0,5% szacharózkoncenlrációnál a fényben nőtt kalluszok súlya számottevően nagyobb, mint a sötétben nőtt kalluszoké, így 0,2% szacharóz-koncentráció esetében a különbség csaknem kétszeres, 0,3% szacharóz-koncentrációnál közel 2,5-szeres, és 0,4- -0,5% cukorkoncentrációnál is ekörül mozog. Ugyanakkor a növekedés mértéke kísérleti szempontból még megfelelő, például 0,3% szacharózt tartalmazó táptalajon a 2,0% szacharóz-koncentrációjú táptalajon mért súly felél kapjuk. A kísérleti adatok egyértelműen igazolják, hogy alacsony szacharóz-koncentrációjú táptalajon a kalluszok, amellett, hogy növekedésükhöz külső cukorellátást is igényelnek, jelentős fotoszintézisfüggő növekedést mutatnak, tehát mixotróf állapotban vannak. 2. példa Az l. példával teljesen analóg módon eljárva, de steril levéldarabkák helyett steril szárdarabkákból kiindulva a következő eredményeket kaptuk (n=18). 2. táblázat Fényben és Bötétben növesztett dohánykalluszok friss súlya különböző szacharóz-koncentrációjú táptalajon Szacharóz- A kalluszok friss BÚlyu (g)-koncentráció fényben sötétben (%) (1000 lx) 0 0.06±0.03 0.06+0.03 0.1 0.22±0.08 0.06±0.02 0.2 0.46±0.10 0.1U0.03 0.3 0.49±0.17 0.16±0.05 0.5 0.69±0.27 0.28±0.11 1.0 0.70±0.35 0.69±0.26 2.0 1.13±0.30 1.12±0.41 3.0 0.93±0.33 0.87±0.43 A 2. táblázatban összefoglalt kísérleti adatokból az 1. példában tárgyaltakkal teljesen azonos következtetéseket lehet levonni, de itt a különbségek a fényben és sötétben nevelt kalluszok BÚlyai között még kifejezettebbek (0,2% szacharóz-koncentráció mellett a különbség több, mint négyszeres). Az l. és 2. példában ismertetett kísérleteket glükóz-tartalmú táptalajokon is megismételjük, és a fentiekkel teljesen analóg eredményeket kaptunk. 3. példa Fotoszintézist gátló herbicidek elsődleges hatásának kimutatása mixotróf szövettenyészetben. Az 1. példa szerint készített Nicotiana plumbaginifolia szövettenyészetben, 0,3%, illetve 3% szacharózt tartalmazó, egyébként az 1. példában megadottal megegyező összetételű táptalajon fényben (1500 lx, 28 °C) és sötétben a fotoszintézisgátló herbicidként ismert terbutrint teszteltük. A kalluszok friss súlyát az 1. példában leírt módon mértük. A herbicideket szűréssel sterilizált törzsoldatból adtuk a meleg (45 °C-os) táptalajhoz. A terbutrin koncentrációját 10"4 és 10"6 mól között változtattuk. A kapott eredményeket, a szórással együtt, a következő 3. táblázatban tüntetjük fel (n=l8). 3. táblázat szacharóz-koncentráció = 3% Terbutrin- A kalluszok friss súlya (g) konc. fényben sötétben (M) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
