190751. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mixotfóf szövettenyészetek és herbicidrezisztens növények előállítására
6 190751 ( A találmány szerinti szelekciós módszer egyszikű és kétszikű herbicid-rezisztens növények előállítására egyaránt alkalmas. Ilyen növényként a példákban felsorolt növényeken kívül szinte valamennyi kultúrnövény, 5 Így gabonafélék, kukorica, paradicsom, burgonya, cukorrépa, napraforgó, szója, gyapot, szóló stb. szóbajóhet. Az, hogy kísérleteink jelentős részét dohánynövényen folytattuk, csupán annak következménye, hogy ez a ki- 10 Bérleti célra leggyakrabban alkalmazott modell növény. A találmány szerinti eljárás ezen felül alkalmas herbicid rezisztencia átvitelére rezisztens növényfajból szenzitlv növényfajok- 15 ba. Az átvitel előnyösen protoplaszt fúzióval történik. A herbicid-reziszlencia tesztelését legelőnyösebb protoplaszt módszerrel végrehajtani, mert ez az eljárás teszi lehetővé idő- 20 egység alatt a lehető legnagyobb mennyiségű sejt tesztelését. Míg egy Petri-csészében csak mintegy 9 kallusz vizsgálható, ugyanekkor az edényben körülbelül 1000 kolónia tesztelhető. A protoplaszt eredetű kolóniák 25 további előnye, hogy egysejt eredetűek, és azért lényegesen homogénebbek, mint a többse jteredetű, ezért genetikailag kevert kalluszok. így a rezisztens növények legelőnyösebben protoplaszt eredetű tenyészetek- 30 ben állíthatók elő. Találmányunk további részleteit a következő példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy találmányunkat a példákra kívánnánk korlátozni. 35 I. példa Nicotiana plumbaginifolia mixotróf szövette- 40 nyéazetének előállítása Nicotiana plumbaginifolia steril levóldarabkáiból ismert táptalajon szövettenyészetet készítettünk. A növényeket a következő ősz- 45 szetételű táptalajon tartottuk fenn: RM I: NH«N0j KNOi CaClj x 2HjO MgSO« (vízmentes) KHjPO« —.— ----------------------------------------------------—----------- 55 6600 mg/1 7600 mg/1 50 1753 mg/1 723 mg/1 680 mg/1 RM II: FeSO* * x7HjO 557 mg/100 ml EDTA 745 mg/100 ml 60 RM III: HsBOj MnSO« x 4HaO ZnSOf x 4HiO 62 mg/100 ml 223 mg/100 ml 86 mg/100 ml 65 KJ Na2Mo04 x 2HjO CuS04 x 5HiO CoCh x 6HjO 8.3 mg/100 ml 2.5 mg/100 ml 0.25 mg/100 ml 0.25 mg/100 ml szacharóz 3 vegyes X agar 0.8 vegyes % 1 liter táptalaj elkészítésekor az RM I törzsoldatból 250 ml-t, az RM II-ből 5,0 ml-t és az RM III törzsoldatból 10 ml-t veszünk. Az RM I, RM II és RM III komponenseket közösen RM-sóknak nevezzük ÍMurashige és misai: Physiol. Plant. IS. 473-497 (1962)]. A növényeket 1000 lx megvilágítás és 70% relatív páratartalom mellett, 25 °C-on tartottuk fenn. A kísérlet megkezdésekor kalluszképződést indukáltunk 1% szacharóz tartalmú táptalajon, 1000 lx megvilágítás mellett, 25 °C-on. Ehhez a következő összetételű táptalajt használtuk: RM sók (RM I+RM II+RM III) inozit tiamin naftil-ecelsav benzil-adenin szacharóz agar *az előbb megadott mennyiségben 100 mg/1 1 mg/1 0.1 rag/1 1.0 mg/1 1 vegyes % 0.8 vegyes % *1 liter táptalaj elkészítésekor az RM I törzBoldatból 250 ml-t, az RM II-ből 5,0 ml-t és az RM III törzsoldatból 10 ml-t veszünk. Kontrollként megvilágítás nélkül, do egyébként azonos körülmények között nevelt tenyészetek szolgáltak. Négy hetes tenyésztés után a megvilágítás mellett, illetve sötétben indukált kalluszokbcl 20 mg-os inokulumokat különböző szacharóz-koncentrációjú táptalajokra helyeztünk, majd a tenyésztést továbbra is fényben, illetve sötétben folytattuk. A táptalaj összetétele - a szacharóz-koncentráció kivételével - a fent megadott volt. Négy hetes növesztés utón mértük a kalluszok friss súlyát. A fényben és sötétben kapott eredményeket a szacharóz-koncentráció függvényében, az átlagértékek mellett a szórós feltüntetésével az 1. táblázatban adjuk meg. Az átlagértékeket 18 mérésből határoztuk meg (n=18). 5
