190708. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szubsztituált dibenzodiazepinonok előállítására
11 190708 1 Minden egyes antimuszkarin hatású vegyületel egyenletesen szétosztott dózisokban, 15 perccel az Oxotremorin beadása előtt intravénásán adtunk be. A kontrollcsoportok hatóanyag helyett a megfelelő mennyiségű oldó- és szuszpendélószert kapták. Az állatokat közvetlenül a Oxotremorin beadása után 15 percig egy üvegketrecben megfigyeltük. A kísérleteket az Oxotremorin indukálta nyálelválasztás befolyásolására vakon végeztük, azaz a kísérleteket végző személy nem tudta, hogy az állatok hogyan voltak előkezelve. Az eredményeket az Oxotremorin hatás százalékos gátlásaként fejeztük ki (a megfelelő szimptóma nélküli állatok százaléka). Az EDso értékeket Litchfield és Wilcoxon módszere szerint állapítottuk meg [J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, 99 (1949)]. A hatásokat a gyomor nyálkahártya elváltozásokra a kővetkezőképpen értékeltük ki: A gyomor nyálkahártya elváltozásokat Oxotremorinnak intravénás injekcióban 0,62 mg/kg dózisban való beadásával váltottuk ki, 30 perccel 1 mg/kg dózisú Neostigmin (Cholinészteráz-gátló) szájon át történő beadása után. 60 perccel a Neostigmin beadása után az állatokat leéltük, gyomrukat kivettük, felnyitottuk és vizsgáltuk, hogy vannak-e nyálkahártya elváltozások. A vizsgált hatóanyagok védőhatását százalékos gátlásként fejeztük ki (az elváltozások nélküli állatok százaléka). Az EDso- ill EDro-értékeket Litchfield és Wilcoxon módszere szerint állapítottuk meg (lásd fent). Mydriaaia A vizsgált hatóanyagoknak a patkányok pupillaszéleBségére gyakorolt hatását a kővetkezőképpen vizsgáltuk: A hatóanyagokat 10 állatból álló csoporton, legkevesebb 3, egyenletesen szétosztott dózisban, intravénásán alkalmaztuk. Ezután 10 percen át figyeltük, hogy a pupülaszélesaégben van-e változás (Mydriasis vagy Miosis fellépése) és a vizsgálatokat ismét vakon végeztük, azaz a kísérleteket végző személy számára az állat előkezelése ismeretlen volt. Azoknak a kísérleti Állatoknak a százalékos arányát vizsgáltuk, amelyeknél mydriasiB lépett fel. Az EDso-értékeket ÍBmét Litchfield és Wilcoxon módszere szerint határoztuk meg (lásd fent). 2. Tanulmány a muszkarin receptorokhoz való kötődésről: Az ICso-érték meghatározása A kísérletekhez a szerveket 180-220 g testsúlyú hím Sprague-Dawley patkányok szolgáltatták. A szív, a gyomor és az agykéreg kivétele után minden további lépést jéghideg Hepes HCl-pufferben (pH = 7,4; 100 millimólos NaCl, 10 millimólos MgCb) hajtottuk végre. A gyomorfenék sima izomzatát a gyomor nyálkahártyáról leválasztottuk és előhoraogenizáltuk. Az egész szivet ollóval szétdaraboltuk. Végül minden szervet Potter-oldatban homogenizáltunk. A kötődési vizsgálatokhoz a szervhomogenizátumokat a következőképp hígítottuk: Gyomorfenék simaizom 1 : 100 A teljes szív 1 : 250 Agykéreg 1 : 3000 A szervhomogenizátumok inkubációját 30 ®C-on Eppendorf-centrifugacsővekben hajtottuk végre a radioligandnak egy meghatározott koncentrációjánál és a nem radioaktív vizsgálati anyagok koncentrációsorozatánál. Az inkubáció 45 percig tartott. Radioligandként 0,3 mmóloe 3H-N-metil-szkopolamint (3H-NHS) használtunk. AZT inkubció befejeződése után 14 000 g értéknél centrifugáltunk és a tabletta alakú anyag radioaktivitásét meghatároztuk. Ez a 3H-NMS specifikus és nem-specifikus kötődésének összegét reprezentálta. A nem-specifikus kötődés részarányát úgy definiáltuk, mint azt a radioaktivitást, ami 1 p molar kinuklidinil-benzilét jelenlétében megkötődött. Minden meghatározást négyszer végeztünk el. A nem-jelzett vizsgálati anyagok ICso-értékét grafikusan határoztuk meg. Ezek a vizsgálati anyagnak azt a koncentrációját reprezentálják, amelynél a különböző szervekben a 3H-NMS specifikus kötődése a muszkarin receptorokhoz 50%-kal gátolt. A táblázatban közölt adatok szerint a következő vegyületeket vizsgáltuk: A n 5,10-dihidro-5-[(l-metil-l,2,5,6-tetrahidro-4-piridinil)-karbonil]-llH-dibenzo(b,e)(l,4)diazepin-ll-on B = 6-klór-5,10-dihidro-5-[(l-metil-4-piperidinil)acetil]-llH-dibenzo(b,e)(l,4)diazepin-ll-on C - endo-5,10-dihidro-5-{[8-metil-8-aza-biciklo(3,2,l)okt-3-il]acetil)-llH-dibenzo(b,e)(l,4)diazepin-ll-on 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 7
