190569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyulladásgátló hatóanyag előállítására
4 190560 5 préseléssel elválasztott folyadék tartalmazza a végtermékként kinyerni kivánt poliszacharid-frakciót. A vizes közegből a koncentrátumot 1-3 szénatomos alkohollal vagy acetonnal, esetleg 1-3 vegyértékű kation felhaszná- 5 lásával csapjuk ki. Az egyes kicsapási módszerek egymással kombinálhatók is. A kinyerhető hatóanyag súlya a kiindulási anyag szárazanyagtartalmára számitva 0,1-1,0 súly% között ingadozik. További feldolgozási lehető- 10 ség az, hogy az aprított növényi anyagot súlyára számítva 1-20-szoros vízzel kivonatoljuk, a kivonatot 60 °C-on hőkezeljük, a hókezelt kivonatot centrifugálással és szűréssel tisztítjuk, az oldatból a poliszacha- 15 ridot 2-3-szoros térfogatú alkohollal kicsapjuk és 24 óra állás után a csapadékot centrifugálással és szűréssel az anyalúgtól elkülönítjük, és alkohollal kimossuk. A kicsapott nyers hatóanyag tisztítását úgy végezzük, 20 hogy a nedves anyagot 10-szeres mennyiségű vízben feloldjuk, 75 °C-ra felmelegítjük, a kivált anyagokat centrifugálással eltávolítjuk és a felülúszót 3-szoros térfogatú alkohollal elegyítjük. 24 óra állás után a kivált 25 csapadékot centrifugálással és szűréssel elkülönítjük, alkohollal mqssuk és vákuumban legfeljebb 40 °C-on megszárítjuk. További tisztítás úgy érhető el, hogy a szárított terméket 30-40-szeres mennyiségű 30 50-75 °C közötti vízben feloldjuk, centrifugálással tisztítjuk és 3-10 att nyomás alatt olyan membránon szűrjük át, amely a 75 000- -nél alacsonyabb molekulasúlyú anyagokat átereszti, majd a membrán nagymolekulasúlyú 35 oldalán maradt oldatból a poliszacharidot alkohollal kicsapjuk. A vizes oldatból a poliszacharid acetonnal is kicsapható. A találmány szerinti gyulladásgátló hatású készítmény valamilyen fenti módszerrel 40 izolált hatóanyagot és adott esetben valamilyen nem szteroid gyulladásgátlót, kiváltképp indomethacint vagy acetilszalicilsavat illetve származékait tartalmazza a szokásos segédanyagok és vivőanyagok kíséretében. A gyó- 45 gyászati készítmény per os vagy parenterális adagolásra alkalmas, formája szerint tabletta, drazsé, kapszula, infúzió, emulzió, injekció, oldat, kúp, iraplanátum vagy külsőleg alkalmazható oldat, nyák, krém, kenőcs vagy zse- 50 lé. A gyulladásgátló készítmények gyógyászati vagy kozmetikai célra használhatók és úgy állíthatók elő, hogy a hatóanyagot gyógyászati vagy kozmetikai készítmények előállítására szokásos segédanyagokkal és/vagy vi- 55 vöanyagokkal elkeverjük. A találmány szerint előállított hatóanyag gyulladásgátló hatását C.A. Winter és mtsai Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 111. 544 (1962) szerint patkányláb carrageenin ödéma-tesz- 50 ten vizsgáltuk. A hatóanyag jelentős specifikus aktivitással és ezzel összefüggő előnyös gyulladásgátló hatással rendelkezik rendkívül alacsony toxicités mellett. A találmány szerinti hatóanyag izolását és farmakológiai hatását a következő kiviteli példákkal szemléltetjük: 1. példa 1 kg héjától és magjától megtisztított Cucurbita maximae fructust 1,5 liter 20 °C-os csapvízzel elkeverve dezintegrátorban elpépesitünk, majd hidraulikus présen 130 att nyomás alatt préseljük. A préslevet K-5 jelű Seitz szürölapon átszűrjük, 1500 ml szűrletet kapunk, amelyet 40 °C-on csökkentett nyomáson 40% szárazanyagtartalomra besűrítünk. A 140 ml sűrítményhez keverés közben 300 ml 96%-os etilalkoholt adunk. A csapadékot tartalmazó elegyet 12 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az üledéket centrifugálással elválasztjuk, majd 100 ml 96%-os etilalkohollal eldörzsőljük, szűrjük és csökkentett nyomáson szárítjuk. így 3,0 g hatóanyagot kapunk. 2. példa 10 kg Cucurbita maxima fructust - amely 0,15% hatóanyagot tartalmaz - kettévágunk és a magokat eltávolítjuk. A kiindulási anyagot dezintegrátorral durva péppé aprítjuk, ezután 10 liter csapvizben felvesszük. Az elegyet keverés közben 35 °C-ra melegítjük, 1 óra hosszat élénk keverésben tartjuk, majd 6 óra állás után kipréseljük. 12 liter préslevet kapunk. A présmaradékot 10 liter csapvizben szuszpendáljuk, 1 óra hosszat keverjük, majd préseljük, amikor ismét 12 liter préslevet kapunk. A két préslevet egyesítjük, keverés közben 60 °C-ra felmelegítjük, majd centrifugáljuk és a fehérjecsapadékot elöntjük. A centrifugált oldatot Seitz K-5 jelű szűrőpapíron átszűrjük, a csapadékot elöntjük. Az üledékmentes oldatot csökkentett nyomáson 60 °C hőmérsékleten 10-20% szárazanyagtartalorara sűrítjük be. A szobahőmérsékletre lehűtött sűrítményt centrifugáljuk, a csapadékot elöntjük. A felülúszóhoz háromszoros térfogatmennyiségű metilalkoholt adagolunk erős keverés közben és a csapadékos oldatot 24 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A felülúszót dekantáljuk és elöntjük. A csapadékos oldatot centrifugáljuk, majd a csapadékot 500 ml metanolban dezintegráljuk és centrifugáljuk. A centrifugálással kapott csapadékot még kétszer metilalkohollal kimossuk. A csapadék harmadszori dezintegrálása után a csapadékos oldatot vákuum-szivó szűrőre öntjük és az anyalúgot leszívatjuk. A nuccsnedves fehér csapadékot 10-szeres mennyiségű desztillált vízzel dezintegráljuk, az oldatot keverés közben 75 °C-ra felmelegítjük és melegen centrifugáljuk. A tisztított oldathoz keverés közben háromszoros 4
