190569. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyulladásgátló hatóanyag előállítására
6 11)0561) 7 térfogatmennyiségű metilalkoholt öntünk és 24 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Állás után centrifugáljuk, a kapott csapadékot 300 ml metanollal dezintegráljuk és újra centrifugáljuk. A metanolos mosást és dezintegrálást még kétszer megismételjük, majd a harmadik tisztítási művelet után a csapadékot a vákuum-szivó szűrőn megszűrjük és a szűrt csapadékot vákuumban 40 °C-on megszáritjuk. 21,1 g fehér poralakú hatóanyagot kapunk. További tisztítás céljából a nyers hatóanyagot feloldjuk 600 ml 50 °C hőmérsékletű desztillált vízben, 1 óra hosszat állni hagyjuk, majd centrifugáljuk. A felülúszót 5 att nyomáson membránszürő (Diaflo XM 300, gyártómű Amicon Co, USA) segítségével szűrjük, amely a 75 000-nél magasabb molekulasúlyú vegyületeket visszatartja. A membránszűrő nagymolekulasúlyú oldalán maradt oldatot desztillált vizzel háromszorosára felhígítjuk, majd az oldatot ismét a membránszűrőn átnyomatjuk. Végül a szűrő nagymolekulasúlyú oldalán maradt oldatot centrifugáljuk és a felülúszóhoz keverés közben háromszoros térfogatmennyiségű metilalkoholt öntünk. Ezzel 24 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált csapadékot vákuum-szívó szűrőn megszűrjük és a szűrt terméket 40 °C-on megszáritjuk. A tisztított hatóanyag súlya 13,2 g. 3. példa 1050 kg Cucurbita maxima fructust durván aprítunk, a magokat eltávolítjuk, és az 1000 kg súlyú magmenles anyagot kalapácsos őrlővel finoman aprítjuk. A kapott pépet 1000 liter vizzel szuszpendáljuk, majd dekanteren szétválasztjuk 500 kg rostos zagyra és 1500 kg vizes felülúszóra. A rostos zagyot 470 liter 20 °C hőmérsékletű csapvízzel szuszpendáljuk, 2 óra hosszat keverjük, majd újra dekantáljuk. így 570 kg rostos zagyot és 400 liter vizes oldatot nyerünk. A második dekantálás után kapott rostos zagyot 150 att nyomáson, 50 mm-es kezdeti rétegvastagság mellett kipréseljük, így végül 240 kg présmaradékot és 370 kg préslevet nyerünk. A présmaradékot eldobjuk, a vizes oldatokat egyesítjük, így összesen 2270 kg vizes oldatot kapunk, melynek pH-ját 20%-os vizes citromsav oldattal keverés közben 4,3-4,4-re állítjuk be. Ezután az elegyet 20 °C-on 12 óra hosszat állni hagyjuk. A kivált csapadék egy része ezalatt leülepszik, a felülúszót részben dekantálással, részben szeparálással eltávolítjuk, és igy 2080 kg vizes oldatot 120 kg szeparátor iszapot nyerünk. A vizes oldatot vákuumban besűrítjük, úgy, hogy a sűrítmény hőfoka: 40-42 °C, a góztér hőmérséklete: 70-75 °C, a sűrítmény súlya: 157 kg, a sűrítmény szárazanyagtartalma 28,5%, a sűrít nény pH-ja 4,50 és sürités időtartama 7 őre legyen. A sűrítményt a sűrítés közben kivált porszerü csapadéktól szeparálással megtisztítjuk, így végül 153 kg tisztított sűrítményt kapunk, melyhez erős keverés közben 20 °C-on hozzácsurgatunk 385 liter metanolt, 30 percig még keverjük, majd 20 órán keresztül állni hagyjuk. A csapadékos oldatot először dekantáljuk, majd szürócentrifugán szírjük, a kapott csapadékot 10 liter metanollal mossuk, igy 20 kg nedves csapadékot nyerünk, melyet 80 liter metanol jelenlétében turmix homogenizátorban szuszpendálunk, ismét szürócentrifugán szűrjük, és ismét 10 liter metanollal mossuk. Az előbbi eljárást öszszesen 3-szor megismételjük. A végül nyert cer trifuganedves csapadékot 80 °C-on áramló levegőben szárítjuk 50%-os szárazanyag tartalom eléréséig. Ezután granuláljuk, 2 mm-es szemcseméretre, majd 50 °C-os levegőben súlyállandóságig szárítjuk. A kapott termék súlya 7,0 kg. A termék analitikai jellemzői: Fehér színű amorf por, alkoholban, acetonban, kloroformban, éterben, etilacetátban_ nen oldódik. Kiforralt desztillált vízben 2 órai rázatás útin az 5%-os bemérés 80%-a oldódik föl. A vizes oldat kémhatása: 5%-os bemérésnél 6,0 pH (5,0-7,0 között). Összes cukortartalom: 42,2% (min: 40%) Redukáló cukor: 33,0% (min: 30%) Összes N: 1,94% (min: 1,5%) N-tartalom Biuret reagenssel: 2,66% (nagyobb mint: 1,5%) P-tartalom: 1,15% (min: 1,0%) Izzitási maradék: 22,74% (max:25%) Gázkromatográfiás cukor összetétel: glukóz 76.9% mannóz 4.9% arabinóz 2.1% ramnóz 1.4% nem azonosított 14,7% Gyulladásgátlás: min. 40% 10 mg/kg i.p. adagnál patkánytalp ödéma teszten. A mólsúly eloszlás meghatározása céljából 38,” mg terméket kromatografálunk Sepharose CL-6B oszlopon. Az oszlop átmérője: 27 mm, hossza: 260 mm, üres térfogata 150 cm3, kai brálása Blue dextran 2000 standarddal történik köpenye áramló meleg vízzel 65±3 °C -ra termosztáit. A töltet: 150 cm3, Sepharos: CL-6B szuszpenzió és 6 g üvegszál vág dalék. A frakciók: 5 cm3 egyenként, a meghatározás: spektrofotometriás úton fenolkér sav reakcióval történik, a referencia anyag glukóz. Az eluálószer: 0,2% NaNOa-ot tartalmazó desztillált víz. Az előbbiek szerint eljárva a következő molekulsúlyeloszlást kaptuk 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
