190350. lajstromszámú szabadalom • Eljárás béta-ekdizon és rokonvegyületek előállítására
1 190 350 2 csak béta-ekdizon, hanem egyéb, ugyancsak jelentős biológiai hatással rendelkező ekdizoidok is izolálhatok. Találmányunk szerint eljárva előnyösen pl. : Silene otites növényből indulunk ki, melynek szárított és őrölt herbáját, annak súlyára számítva 8-szoros mennyiségű 30%-os vizes etanollal vagy 30%-os vizes metanollal szobahőmérsékleten extraháljuk. A kivonatot csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot porlasztva szárítjuk, így porszerű száraz kivonatot kapunk, melyet 3 részletben összesen 15-szörös mennyiségű metanollal extrahálunk, az oldhatatlan anyagot szűréssel távolítjuk el. A szürletet bepárolva a maradékot ismét oldjuk metanolban, majd a szennyezéseket 1/2 térfogatnyi aceton hozzáadásával kicsapjuk, esetleg ezt az eljárást megismételjük. Az oldatban maradt anyagot végül bepárlással izoláljuk, majd súlyára számítva 3-szoros mennyiségű Brockmann II. szerinti aktivitású AI20J-ra adszorbeáltatjuk. Az eluciót diklórmetán és metanol 9 : 1 arányú elegyével végezve frakciókat szedünk, melyek összetételét azonosított kontroll anyagokkal szemben vékonyréteg-kromatográfiásan vizsgáljuk. Ezen főkromatografálás különböző frakcióiból, azokat bepárolva és a maradékot Al20J-on újra kromatografálva, növekvő polaritású diklórmetán/etanol-elegyeket alkalmazva eluensként, majd az újabb kromatografálások megfelelő frakcióit bepárolva és a maradékokat kristályosítva nyeljük a 2-dezoxi-alfa-ekdizont, 2-dezoxi-bétaekdizont, béta-ekdizon-22-acetátot és a béta-ekdizont. A találmányunk szerint előállított béta-ekdizon saját vizsgálataink szerint a fehérjeszintézist fokozó hatása alapján az állattenyésztésben felhasználható súlyhozamfokozó hatással bír, melyet a következő táblázat is mutat: A béta-ekdizon napi egyszeri intraperítoneális adagjának hatása a Sprague-Dowley CFY nőstény patkányok testsúlyának alakulására 15 napos kezelési periódusban: Állatok, átlagsúly g-ban Kísérlet ------------------------------------------napja Komro béta-ekdizon béta-ekdizon 50 g/kg ip. 100 g/kg ip. 1. 166,63 167,20 166,89 2. 173,75 176,44 172,44 3. 181,00 180,50 177,30 4. 180,69 182,16 185,28 5. 182,75 185,66 190,38 6. 180,19 185,78 193,22 7. 184,50 189,89 199,28 8. 184,50 188,50 199,50 A hatás közelebbi vizsgálata során megállapítottuk, hogy béta-ekdizont, vagy 2-dezoxi-béta-ekdizont napi 5 mg/kg adagban hím patkányoknak szájon át négy héten át adagolva, a kontrolihoz képest szignifikáns mértékben fokozódik a musculus levator ani és a vesicula seminalis súlya. Ezen szervek súlynövekedése lényegesen jobban kifejezi fenti anyagok anabolikus hatását, mint a testsúlynövekedés vizsgálata. Nem növelte ezzel szemben a béta-ekdizon a prosztata súlyát, ami arra enged következtetni, hogy az anabolikus hatást androgén hatás nem, vagy csak elhanyagolható mértékben kíséri. A találmányunk szerinti eljárás néhány megvalósítási módját a következő példák szemléltetik, anélkül azonban, hogy eljárásunkat ezekre korlátoznánk. 1. példa 4 kg Chenopodium album gyökeret (szárazanyagtartalom: 20%), szárítás és őrlés után 150 1 metanollal extrahálunk 20 'C-on. Az extraktumot bepároljuk csökkentett nyomáson és a maradékot 1500 cm3 50%-os metanol-víz-elegyben oldjuk. Az oldatot 8 x 500 cm3 petroléterrel extraháljuk, majd bepároljuk csökkentett nyomáson 700 cm3-re és ezt extraháljuk 16x500 cm3 diklórmetánnal, majd 36 x 500 cm3 diklórmetán : metanol 2 : 1 arányú elegyével. Az egyesített diklórmetán-metanolos extraktumok csökkentett nyomáson történő bepárlása után 8 g maradékot kapunk. Ezt kromatografáljuk 100 g Woelm-féle poliamid-oszlopon. Az oszlop vizes eluciójával nyert frakciót egyesítjük az előző extrakciós lépés vizes részével, csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, majd 15 1 metanollal extraháljuk, melynek csökkentett nyomáson való bepárlásával 6,5 g szárazmaradékot kapunk. Ezt 800 g poliamidból készített oszlopon kromatografálva, majd a vizes elucióval kapott anyagot 500 g szilikagél oszlopon újra kromatografálva, utóbbit 85 : 15 arányú diklórmetán/etanol-eleggyel eluálva, végül 0,14 g béta-ekdizont kapunk. Op: 237-239 *C (etilacetát és metanol elegyéből), a 2,3,22-triacetát-monohidrát olvadáspontja : 151-154 °C (metanolból). 2. példa 1,3 kg Chenopodium Bonus Henricus friss gyökérőrleményt (szárazanyagtartalom: 20%) 701 metanollal perkolálva, majd a kivonatot csökkentett nyomáson szárazra párolva 350 g maradékot kapunk, melyet 15 I metanollal extrahálva, majd a kivonatot csökkentett nyomáson szárazra párolva 35 g maradékot kapunk, melyet 5 kg Brockmann II. szerinti A1203 oszlopon kromatografálva, diklórmetán : etanol = 9:1 eleggyel eluálva 0,20 g béta-ekdizont kapunk, melynek jellemzői az 1. példában megadottakkal azonosak. 3. példa 1870 g Serratula tinctoria friss földfeletti részt (szárazanyagtartalom: 10%) 201 metanollal, majd 101 metanol : víz = 1 : 1 eleggyel extrahálva, az extraktumot csökkentett nyomáson 500 cm3-re bepárolva, a kapott vizes részt 10 x 200 cm3 petroléterrel kirázva, majd bepárolva, 73,4 g maradékot kapunk. Ezt 1640 g Brockmann II. szerinti Al203-on kromatografálva, diklórmetán : etanol = 9:1. ele5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
