190207. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új gonadoliberin származékok előállítására

A találmány tárgya eljárás az új (I) általános

kf pleíü

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X,-X2-X3-Pro-X4 - amely képletben j

Xj jelentése glicil-, D-alanil-, D-leucil-, 0-; tercier-butil-D-szeril-, D-triptofil- vagy D-fenilala-j nil-csoport,

X2 jelentése leucil-, triptofil- vagy fénilalanilcsoport,

X3 jelentése leucil- vagy glutaminil-csoport,

X4 jelentése glicil-amid- vagy etil-amidcsoport,

azzal a megkötéssel, hogy ha X, jelentése D- alanil-,

X2 jelentése triptofil-, X3 jelentése leucil-csoport, akkor X4 jelentése csak etil-amid-csoporttól eltérő lehet -nonapeptid etil-amid, illetőleg dekapeptid-amid, valamint e vegyületek sóinak az előállítására.

A képletekben alkalmazott rövidítések megegyeznek a peptid-kémiában elfogadott nómenklatúrával, amelyet például al J. Biol. Chem. ismertet {241, 527 /1966/). Ennek megfelelően a leírásban előforduló rövidítések jelentése a következő:

Glp:

X

piroglutaminsav- x -(piroglutamil)

His:

hisztidin

(hisztidil)

Trp:

triptofán

(triptofil)

Ser:

szerin

(szeril)

Tyr:

tirozin

(tirozil)

Gly:

glicin

(glicil)

Phe:

fenil-alanin

(fenil-alanil)

Leu:

leucin

(leucil)

Pro:

prolin

(prolii)

Glu:

glutaminsav

(glutamil)

Gin:

glutamin

(glutaminil)

Me:

metil

Et:

etil

Boc:

terc.-butil-oxi-karbonil

Bzl:

benzíl

UV:

ultraibolya

Tos:

tozil

ONP:

p-nitro-fenil

DNP:

dinitro-fenil

EA:

etil-amid

Z:

benzil-oxi-karbonil

DMF:

dimetil-formamid

THF:

tetrahidro-furán

TFA:

trifluor-ecetsav

TEA:

trietil-amin

DCC:

diciklohexil-karbodiimid

DIC:

diizopropil-karbodiimid

DCU:

diciklohexil-karbamid

HPLC

nagynyomású folyadék-kromatográfia

TLC:

vékonyréteg-kromatográfia.

A gonadoliberin (a szakirodalomban ismert egyéb nevei: gonadotropin releasing hormon, Gn RH, luteinizáló és follikulusz-stimuláló hormon, releasingl hormon, LH/FSH-RH) és e hormon ismert származékainak általános tulajdonsága, hogy képesek a luteinizáló és a follikulusz-stimuláló hor monok (LH és FSH) felszabadítására.

A 80-as évek elején vált ismertté, hogy bizonyos halakban a gonadoliberin szerkezete eltér az emlősökben található gonadoliberin szerkezetétől (J. A.

King és R. P. Miliar, J. Bioi. Chem. 257, 10 722-28 (1982); South-African Journal of Science 78, 124 (1982); N. Sherwood at al. Proc. Natl. Acad. Sei. 80, 2794-2798 (1983). Ezek az eltérések a 7., illetve a 8. helyzetben levő aminosavakat érintik.

Az irodalomból az is ismeretes, hogy azok a gonadoliberin származékok, amelyek a 6-os helyzetű glicin helyett bizonyos D-aminosavakat tartalmaznak, a gonadoliberinhez viszonyítva megnövekedett hatást mutatnak J. Sandow at al., Control of Ovulation, Butterworth, London, 1978. pp. 49-70.

Ismeretes továbbá, hogy a 10-es helyzetben levő glicin-amid csoportot alifás szénláncú amidcsoportokkal helyettesítve a gonadoliberin biológiai hatása tovább fokozható (M. Fujino et al., J. Med. Chem. 16, 1144-1147 /1973/).

A 4,410,514-es számú USA-beíi szabadalmi leírás halak szaporítására alkalmas vegyületként ismerteti a [D-Ala6, Tro7, Leu8,desGlyl0]-gonadoliberin etilamidot.

A találmány célja olyan új gonadoliberin-származékok előállítása, amelyek hatékonyan használhatók halak szaporítására.

A találmány további célja ezen vegyületek olyan származékainak az előállítása, amelyek az alapvegyületeknél kedvezőbb biológiai hatékonyságot mutatnak.

A találmány alapja az a felismerés, hogy a gonadofiberin 7-es és 8-as helyzetű aminosavainak bizonyos aminosavakra való cseréjével, illetve ezen cserék bizonyos kombinációival halak szaporítására alkalmas gonadoliberin-származékok állíthatók elő.

A találmány további alapja az a felismerés, hogy a gonadoliberin 7-es és 8-as helyzetű aminosavainak cseréjével előállított gonadoliberin-származékok biológiai hatékonysága növelhető a 6-os helyzetű glicin-csoportnak bizonyos D-aminosavakra történő cseréjével, illetve a 10-es helyzetű glicinamid-csoportnak alkil-amid-csoportra való kicserélésével.

A fentiek alapján a találmány eljárás az (I) általános képletü

Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Xi-X2-X3-Pro-X4 (I)- amely képletben XH X2, X3 és X4 jelentése a fenti- nonapeptid-etil-amid, illetve dekapeptid-amid és e vegyületek sóinak az előállítására.

A találmány értelmében úgy járunk el, hogy

a) a szilárd fázisú peptidszintézis módszerét alkalmazva valamely szilárd hordozóra a megfelelő sorrendben lépésenként kondenzáljuk a védett aminosavakat karbodiimides vagy aktív észteres kapcsolással, és a végterméket savas vagy lúgos hasítással távolítjuk el a szilárd hordozóról, és a védőcsoportokat a gyantáról való lehasítással egyidejűleg vagy azt megelőzően vagy követően távolítjuk el, vagy ^

b) lépésenkénti és a fragmens kondenzáció megfelelő kombinációit alkalmazva a védett aminosavakat kondenzáljuk, és a védőcsoportokat eltávolítjuk.

Szilárd hordozóként benzhidril-amin gyantát vagy klór-metilezett-polisztirol gyantát célszerű használni.

\

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65