190129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karboxi-peptidáz b enzim elkülönítésére emlősők hasnyálmirigyéből
12 190129 13 lük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót aminónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (65 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 106,5 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 95,5 /umól hippuril-L- arginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 16. példa 0,2 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán ét szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 200 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 310 g/1 koncentrációig telítettük (310 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldob tűk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (67,2 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 135 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 44,3 /umól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 17. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogai jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386,4 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 360 g/1 koncentrációig telítettük (52 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 76 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 123,8 /umól hippuril-I,-arginin hidrolízisei perclmg fehérje. 18. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffe.rt (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386,4 ). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 350 g/1 koncentrációig telítettük (39 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 45 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 286,7 /umól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje-19. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (386,4 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 340 g/1 koncentrációig telítettük (26 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 25,5 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 195,8 /umól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
