190129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karboxi-peptidáz b enzim elkülönítésére emlősők hasnyálmirigyéből
14 190129 15 3. Tnblúzai. Az ammónium-szulfátt.al történő frakcionálás hatása a karboxipoptidáz B aktivitására Ammónium-szulfát. koncentráció (g/1) 1. telítés 2. telítés Összaktiv it.ás (egység/kg hasnyálmirigy) Összfehér je (mg/kg hasnyálmirigy) Specifikus aktivitás (egység/mg) 340 370 21 373 380 56.2 330 370 27 670 310 89.0 320 370 40 697 426 95.5 310 370 29 914 675 44.3 320 360 37 629 304 123.8 320 350 51 610 180 286.7 320 340 19 977 102 195.8 20 20. példa 1 kg marha hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 1 liter 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 60 “O-ra melegítettük fel, és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogaIrész (3,8 liter) jeges vizet és centrifugáltuk. A felülűszót ammónium-szulfáttal 320 g/1 koncentrációig telítettük (1,6 kg). Egy éjszakai állás után a szuszpenziói centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfattal 350 g/1 koncentrációig telítettük (165 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tria-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd 406 mg nátriuin-kloridot adtunk hozzá és lefagyasztottuk. Kitermelés: 238,7 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 15,4 /uniói hippuril-L-argitiin hidrolízise(perc)mg fehérje-Szn hu dühíti igériypon t Eljárás karboxipoptidáz B enzim elkülöní- 25 tósóre emlősök hasnyálmirigyéből, homogenizátum-készítés (is autolízis után, azzal jellomozve, hogy az autolizátuinot. 5,0-8,5, célszerűen 6,0-7,0 pli-jú pufferrol 1:1 arányban hígítjuk és 50-75 °C-on célszerűen 50-65 °C~ 30 on 5-30 percig, célszerűen 15-25 percig hőkezeljük, majd az így nyert elegyet centrifugáljuk vagy szűrjük, a felülúszóhoz literenként 200-320 g, célszerűen 300-320 g ammónium-szulfátot adunk, az adott esetben 35 kapott szuszpenziót centrifugáljuk, a nyert folyadékhoz literenként 10-80 g, célszerűen 25-35 g ammónium-szulfátot adva kicsapjuk az aktív karboxipeptidáz B enzimet tartalmazó frakciót, majd ezt a csapadékot centrifu- 40 gáljuk, az így nyert enzimet vízben vagy pufferoldatban oldjuk és vízzel vagy pufferoldattal szemben dializóljuk, végül a nyert terméket lefagyasztjuk. 45 ábra nélkül A kiadásért felel a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 88.123.66-4 Alföldi Nyomda Dchrcc.cn - Felelős vezető: Bonkő István vezérigazgató
