190129. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karboxi-peptidáz b enzim elkülönítésére emlősők hasnyálmirigyéből
10 190129 11 az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 552 mg karboxipopLidéz B. -Specifikus aktivitás: 14,3 /umól hippuril-L-arginín hidrolízise(perc)mg fehérje. 12. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnup hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos Tris-HCl puffert (pH=8,5), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felüluszóhoz 217 g animónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felüluszóhoz - a 5 pH=7,0-7,2-re állítása után - 197 g ammónium-szulfátot adtunk. Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °0-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel 10 szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 1209 mg karboxipeplidáz B. Specifikus aktivitás: 6,4 /umól hippuril-L-urginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 15 2. Táblázat Sertés hasnyálmirigy homogenizátum hőkezelésénél (60 9C, 20 perc) alkalmazott puffer pH-jának hutása a karboxipeptidáz B aktivitására PH Összaktivitás (egység/kg hasnyálmirigy) Összfehérje (mg/kg hasnyálmirigy ) Specifikus aktivitás (egység/mg) 5.0 21 348 1 440 14.8 5.5 25 808 1 268 20.3 6.0 98 333 1 724 57.0 6.5 52 767 1 204 43.8 7.0 64 882 1 625 39.9 7.5 48 400 2 780 17.4 8.0 • 31 632 2 210 14.3 8.5 30 753 4 836 6.4 13. példa 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogat jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 340 g/1 koncentrációig telítettük (408 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (41,1 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hideg (+4 °C-os) Tris- HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 95 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivitás: 56,2 mól hippuril-l,-arginin hidrolízise) perc/mg fehérje. 14 14. példa 0,2 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 200 ml 0,05 mólos foszfát puffert (pH=6,0), a szuszpenziót 40 60 °C-ra melegítettük fel és 20 percig ezen a hőmérsékleten tartottuk, majd hozzáadtunk 2 térfogai jeges vizet és centrifugáltuk. A felülúszót ammónium-szulfáttal 330 g/1 koncentrációig telítettük (330 g). Egy éjszakai 45 állás után a szuszpenziót centrifugáltuk, a csapadékot eldobtuk, a felülúszót ammónium-szulfáttal 370 g/1 koncentrációig telítettük (44,8 g). Egy éjszakai állás után a szuszpenziót centrifugáltuk. A csapadékot kevés hi- 50 deg ( + 4 °C-os) Tris-HCl pufferben (pH=7,0) feloldottuk és desztillált vízzel szemben sómentesre dializáltuk. Dialízis után az oldatot szűrtük, majd lefagyasztottuk. Kitermelés: 62 mg karboxipeptidáz B. Specifikus aktivi- 55 tás: 89,0 /umól hippuril-L-arginin hidrolízise(perc)mg fehérje. 15. példa 60 0,25 kg sertés hasnyálmirigyet húsdarálón ledaráltunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten állni hagytuk. Másnap hozzáadtunk 250 ml 0,05 mólos foszfát puffert 65 (pH=6,0), a szuszpenziót 60 “C-ra melegitet-7
