189709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin-észter-származékainak előállítására
1 189 709 2 Alkalmazott vírusok: Herpes simplex type 1 (NOS, Mc Intyre és F. törzsek) és Herpes Simplex type 2 (Lyons, G és 196 törzsek). A hat Herpes simplex törzset valamint a sejtkárosodás retardádiójának meghatározási módszerét E. de Clercq et al., (J. Infect. Dis., 141,563 (1980) ismertetik. A vizsgálati eredményeket a minimum gátló koncentráció értékével kifejezve a következő táblázatban foglaljuk össze. A minimum gátló koncentráció (jug/ml) azt az anyagmennyiséget jelenti, amely a vírusok által a sejtkultúrában okozott sejtkároso- 5 dás értékét az 50%-ára csökkenti. A közölt értékek minden esetben 2—3 párhuzamos vizsgálat átlagát jelentik. Alkalmazott rövidítések: HSV-1 : herpes simplex vírus, Type 1 HSV-2: herpes simplex vírus, Type 2 Táblázat Vegyület Minimum gátló koncentráció (fi gjml) gél das/ám________________________________________________ 'HSV-1 HSV-1 HSV-1 HSV-2 HSCV-2 HSV-2 1. 0,10 0.10 0,10 0,04 0,08 0,07 2. 0,40 0 40 0,40 0,07 0,20 0,10 3. 0,20 0,08 0,50 0,10 0,15 0,10 acyclovir 0,08 0,10 0,09 0,04 0,06 0,06 A táblázat adataiból kitűnik, hogy az 1—3. példák szerinti vegyületek vírusölő képessége lényegében azonos a 9-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin hatásávalb) Vírusölő képesség in vivo Az 1. példa szerinti vegyület in vivo vírusölő hatását az ismert vírusölő bróm-vinil-dezoxi-uridin hatásával hasonlítottuk össze. A vizsgálatnál alkalmazott szemcseppek 0,5% (s/tf) bróm-vinil-dezoxi-uridint ill. 1% (s/tÔ 1. példa 35 szerinti vegyületet tartalmaztak, 1,52 g bórsav, 0.008 g borax és 0,01 g benzalkonium-klorid (+ 100 ml desztillált víz) összetételű izotóniás borát puffer oldatban (pH = 5,7). Placeboként a hatóanyag nélküli oldatot alkalmaztuk. Kísérleti állatként 1,5—2,0 kg súlyú keresztezett 40 California albino és Dendermonde fehér nyulakat alkalmaztunk. A vizsgálatoknál NcNeill és Kaufman (Arch. Ophthalmol. 97. 727-729 (1979) eljárása szerint idéztük elő a stroma keratitist. A nyulakat (30 db) 1 ml/kg fentanil-citrát szubkután adagolásával elal- 45 tattuk, majd 0,2 ml 10 ,5 egység/ml koncentrációjú HSV-1 (McIntyre) vírus-szuszpenziót injekcióztunk mindkét szem szaruhártya-stromájába. A nyulakat három csoportba osztottuk és egyegy csoportot az 1. példa szerinti vegyületet, a bróm- g« -vinil-dezoxl-uridint tartalmazó, illetve placebo szemcseppel kezeltünk. A kezelést egy nappal a vírussal történt fertőzés után kezdtük és 5 egymást követő napon át végeztük oly módon, hogy 1 órás intervallumban naponta 9 alkalommal 1-1 cseppet cseppentettünk mindkét szembe. gg Kialakult keratitis becslése A keratitis kifejlődésének mértékét naponta ugyanaz a személy állapította meg, rés-lámpa (slitlamp) alkalmazásával. Fehérfényű megvilágítással vizsgáltuk a szaruhártya stromát és a külső kamrák struktúráját. 1%-os fluoreszcein nátrium és ko- 60 baltkék szűrő alkalmazásával az epithelialis keratitis és a szaruhártya ulceratio mértékét becsültük. Eredmények A stroma keratitis leküzdésében az 1. példa szerinti vegyületet illetve a bróm-vinil-bezoxi-uridint tartalmazó szemcseppek egyaránt hatásosak voltak, míg a keratitis kialakulásának mértékében az egész vizsgálati periódusban igen jellegzetes különbség mutatkozott a két aktív vegyülettel illetve a placébóval kezelt kísérleti állatoknál. A placebónál kezelt állatoknál már a fertőzést követő első napokban komoly mértékű keratitis alakult ki. Az 1. példa szerinti hatóanyag megakadályozta a stroma károsodását, úgy, hogy a keratitis mértéke közel azonos maradt egyszeri kezelés után. A bróm-vinil-dezoxi-uridin a stroma keratitis fokozatos javulását eredményezte és hatása a 4. naptól kezdve felülmúlta az 1. példa szerinti hatóanyagét. A HSV-1 stroma keratitist a kísérleteknél iritis kifejlődése is kísérte, amelynek szintén jelentős javulását eredményezte mindkét vizsgált vegyület. A placebóval illetve az 1. példa szerinti vegyülettel kezelt állatoknál a 2-8 napon volt megállapítható, jelentős különbség, de hasonló különbség mutatkozott a bróm-vinil-dezoxi-uridin;.2! kezelt állatok javára is. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás új 0) általános képletű 9-(2-hidroxi-etoxi-metil)-guanin-észterek - a képletben X jelentése oxigénatom, R1 jelentése hidroxiksoport, R* jelentése amino-(l-4 szénatomos alkil)-karbonil-csopc"-* és fiziológiailag elfogadható savaddiciós sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános képletű vegyületet - a képletben 5
