189625. lajstromszámú szabadalom • Eljárás OMT és DMT 23-monoészterek előállítására
1 2 189.625 CaCOj 0,3 Szójaolaj (nyers) 0,45 Ionmentes víz 97,25 Más módszerrel az Sfradlae NRRL 12170 növekedő tenyészet folyékony nitrogénben tárolt 1 ml-es adagját gyorsan felolvasztjuk és ezt használjuk a táptalaj beoltására. A beoltott táptalajt 500 ml-es Erlenmeyer lombikban 29 °C-on inkubáljuk 48 óráig 300 ford/perc fordulatú rázógépen. Az így inkubált táptalaj 0,5 ml-ét használjuk fel 7 ml termelő táptalaj ionkulálására, amely termelő táptalaj összetétele az alábbi: Alkotórész Répa melasz Kukoricaliszt Halliszt Nátriumklorid (nh„)2 hpo4 CaC03 Szójaolaj (nyers) Ionmentes víz Mennyiség (%) 2,0 1,5 0,9 0,1 0,04 0,2 3,0 91,36 A beoltott fermentációs táptalajt 50 ml-es edényben 29 °C-on körülbelül 6 napig, 300 ford/perc teljesítményű rázógépen inkubáljuk. B) A DMT tartály-fermentációja Abból a célból, hogy nagyobb mennyiségű ionkulumot készítsünk az A pontban leírt eljárással 1200 ml inkubált-táptalajt készítünk, majd ezt használjuk 250 gallon (1 gallon = 3,78 l) második fázisú tenyésztő táptalaj inokulálására, amely táptalaj az alábbi összetételű: Lecitin 0,09 Víz 91,32 ® A pH-t 50%-os nátriűmhidroxid oldattal 7/2 értékre állítjuk be. Az inokulált termelő táptalajt 6048 1 térfogatú tartályban 8-9 napig 28°C-on inkubáljuk. A fermentációs közeget steril levegővel levegőztetjük úgy, 1 o hogy az oldott oxigéntartalom 30-50 % között legyen, a szokásosan alkalmazott keverőkkel körülbelül 250 ford/perc sebességgel keverjük. C) A DMT izolálása A B pont szerint előállított, összegyűjtött táptalajt 15 (3800 1) leszűrjük, szűrési segédanyag alkalmazásával. A micellás szűrőlepényt vízzel mossuk és ezt a vizes mosófolyadékot is a szú'rlethez adjuk. A szűrlet pH-ját 50%-os vizes nátriűmhidroxid oldat segítségével 9/2 értékre állítjuk be (9,5 1). Aszűrletet ezután etilacetáttai extraháljuk (20001). Az etil- 20 acetátos extraktumhoz keverés közben 4501 ionmentes vizet és 6,4 kg dinátriumfoszfátot adunk. Az így kapott keverék pH-ját 6,0-4,35 érték körüli értékre állítjuk foszforsav oldat segítségével (3300 ml oldat, 2 rész víz, egy rész foszforsav összeté- 2g telű). A vizes fázist elválasztjuk. A betöményített vizes fázis pH-ját 50%-os vizes nátriűmhidroxid oldat segítségével 6,5 értékre állítjuk (700 ml). A kapott oldatot körülbelül 225 1 térfogatúra töményítjük vákuumban. A koncentrált oldat pH-ját 10%-os vizes nátriűmhidroxid oldattal (16 1) 9,2 ér- 30 tékre állítjuk be. A kapott bázikus oldatot éjszakán át állni hagyjuk. A kivált kristályokat leszűrjük, ionmentes vízzel (50 1) mossuk és szárítjuk. 8,6 kg terméket kapunk. Az így kapott termék aceton-víz elcgyből átkristályosítható. Alkotórész Mennyiség (%) Kukorica páclé 1,0 Szójaliszt 0,5 Élesztő extraktum 0,5 CaC03 0,3 Szójaolaj (nyers) Lecitin (nyers) 0,5 0,015 Víz 97,185 A pH 50%-os nátriűmhidroxid oldattal 8,5 értékre van beállítva. A második fázisú tenyésztési táptalajt 1323 1 térfogatú tartályban 48 óráig 28 °C-on inkubáljuk megfelelő levegőztetés és keverés mellett. Az így készített inkubált második fázisú tenyésztési táptalajt (544 1) használjuk fel 3785 1 steril termelő táptalaj inokulálására, amely termelő táptalaj az alábbi összetételű: Alkotórész Halliszt Kukoricaliszt Kukorícasikér CaC03 NaCl (NH4>jHP04 Répanielasz Szójaolaj (nyers) Mennyiség (%) 0,875 1,5 0,875 0,2 0,1 0,04 2,0 3,0 35 2. Hőállítás OMT előállítása DMT-bői Az 1. Előállítás C) pontjában leírt módszerrel 40 előállított DMT-t híg sósavban oldjuk (végső pH 1,8) A kapott oldatot 24 óráig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a pH-t nátrium-hidroxid hozzáadásával 9,0 értékre állítjuk. A bázikus oldatot etilacetáttai, diklórnietánnal vagy kloroformmal 4c extraháljuk. Az extraktumot vákuumban behúzzuk és így OMT-t kapunk. cn 3. Előállítás OMT más előállítási módja DMT-ből Az OMT előállítható a DMT fermentációs elegyének híg savval való kezelésével a 2. Hőállításban leírt eljárás szerint. Az OMT izolálása a reakcióelegyből hasonló módon történik,mint az 1. Előállítás C)pont- 55 jában leírt eljárással a DMT kinyerése történt. Vékonyrétegkromatográfiás analízis A vékonyrétegkromatográfiás analízist szokásosan szilikagélen, megfelelő oldószer-rendszer, mint diklórmetánmetanol:cc. ammóniumhidroxld(90:102) alkalmazásával és UV fény, ánízsaldehid előhívóoldat 60 vagy jód detektálással hajtjuk végre. 3
