189578. lajstromszámú szabadalom • Eljárás marazin előállítására
1 189 578 2 a nagytérfogatú fermentációs táptalajhoz, ha a habzás nehézségeket okoz. A fermentáció során a narazin antibiotikum termelését vagy agar-diffúziós vagy turbidimmetriás módszerrel követjük. A biológiai értékmérést például Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis vagy Micrococcus luteus mikroorganizmussal végezzük. Az antibiotikumos aktivitás általában a fermentáció 40. órájában mérhető, és legalább két vagy több napon át mérhetjük. Az antibiotikum termelés csúcsa a 2-4. napon tapasztalható. A narazin antibiotikumot a táptalajból ismert módszerekkel izoláljuk (lásd Berg és munkatársai, 4 038 384. sorszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). Az új narazin-termelő mikroorganizmus, a Streptomyces gronuloruber NRRL 12 389 jelentős mennyiségű narazin A-komponenst termel kevés fiés D-icomponensekkel együtt. Ezeket a komponenseket a komplex tisztításával egyébként is elkülöníthetjük, például oszlop-kromatográfiás módszerekkel. Ezeket a komponenseket a 4 038 384. sorszámú amerikai szabadalmi leírásban leírják. A találmány szerinti eljárást a továbbiéban, különböző fermentációs táptalajokkal részletesen szemléltetjük. A találmány szerinti eljárást azonban nem szűkítjük a megadott példákra. I. példa A Streptomyces granuloruber NRRL 12 389 mikroorganizmus tenyésztéséhez előállítjuk az alábbi összetételű agart. összetevő Mennyiség (g/1) burgonya-dextrin 10,0 enzimesen hidrolizált kazein1 2,0 húskivonat L0 élesztökivonat LO agar 2,0 Czapek ásványi só-oldata2 2,0 ml ionmentes víz 1,0 literre feltöltve 1 = N-Z-Amine A (Humko Sheffield Chemical Co., Memphis, Tenn.) 2 = Czapek ásványi só-oldata, tételekből állítjuk össze: ezt az alábbi össze-Összetevő Mennyiség (g/100 ml) kálium-klorid 10,0 magnézium-szulfát-7H20 10,0 vas-szulfát-7-H20 0,2 ionmentes viz 100 ml-re feltöltve A Streptomyces granuloruber NRRL 12 389 mikroorganizmus spóráival beoltjuk a fenti összetételű tápagarokat, a beoltott táptalajt pedig 7 napon át 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Az érett ferdeagar-tenyészetre vizet töltünk, felületét steril kacs segítségével a spórák és micéliumok felszabadítására megkaparjuk. 1 ml így előállított spóraszuszpenzióval 100 ml, alábbi összetételű vegetatív táptalajt oltunk. Összetevő Mennyiség (g/1) dextróz 15,0 szójababliszt 15,0 kukoricalekvár 5,0 kalcium-karbonát 2,0 nátrium-klorid 5,0 Czapek ásványi só-oldata 2,0 ml ionmentes víz 1,0 literre kiegészítve A vegetatív tenyészetet 500 ml térfogatú, szélesszájú Erlenmeyer-lombikokban tenyésztjük 30 °C hőmérsékleten, 48 órán át olyan rázóasztalon, amely percenként 108-at mozdul el 5 cm átmérőjű kör mentén. Az inkubált táptalajjal vagy kis fermentorokat oltunk (az oltóanyag mennyisége a fermentációs táptalaj 1 %-a) vagy második fázisú inokulum táptalajt oltunk nagymennyiségű micélium előállítására. 1,0 liter térfogatú Erlenmeyer-lombikokba 200 ml termelő táptalajt töltünk, a táptaljt 121 °C hőmérsékleten streilezzük 30 percen át. A termelő táptalaj összetétele a következő: Összetevő Mennyiség (g/1) dextróz 10,0 ehető melasz 20,0 Bakío pepton 5,0 kálcium-karbonát 2,0 Czapek ásványi só-oldata 2,0 ml ionmentes víz 1,01-re kiegészítve Lehűlést követően 5% vegetatív inokulummal oltjuk be a főfermentációs táptalajokat. A tenyészeteket percenként 108-at forduló (5 cm átmérőjű kör mentén) rázóasztalon inkubáljuk. A táptalaj pH-ja a fermentáció végén (72. óra) 7,5. A fermentációt 30 °C hőmérsékleten végezzük. 2. példa A narazin előállítására az alábbi összetételű, steril, termelő táptalajt használjuk: Összetevő Mennyiség (g/1) szilikon habzásgátló anyag1 0,2 glükóz 10,0 melasz 20,0 pepton (Difco) 5,0 kálcium-karbonát 2,0 ionmentes viz 9,0 l-re kiegészítve 1 = Dow-Corning Antifoam A. A 6,8 pH-jú termelő táptalajt 30 percen át 121 °C 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
