189519. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'''-O-demetil-makrocin-származékok előállítására
1 , 189519 2 IV. Táblázat A DOMM szubkután EDS0-értékei (mg/kg x 2) Vegyület Streptococcus pyogenes C203 Streptococcus pneumoniae Park I Staphylococcus aureus 3055 DOMM U 37.5 3.8 baktérium-fertőzés (x LDjo) 133 41.2 139 Az alábbiakban példákkal szemléltetjük a találmány szerinti eljárást, a példák a találmány oltalmi körét nem korlátozzák. 1. példa A) A DOMM előállítása rázott tenyészetben A Streptomyces fradiae ATCC 31 669 törzs fagyasztva szárított tenyészetét 1-2 ml steril vízben szuszpendáljuk. A szuszpenzió 0,5 ml-ével 150 ml alábbi összetételű vegetatív táptalajt oltunk : összetevő Mennyiség (%) kukoricalekvár 1.0 élesztőkivonat 0,5 szójabab dara 0,5 kalcium-karbonát 0,3 szójabab olaj (nyers) 0,45 ionmentes víz 97,25 Eljárhatunk oly módon is, hogy a S. fradiae ATCC 31 669 vegetatív tenyészetének 1 ml-nyi mennyiségét, amit folyékony nitrogénben tároltunk, felhasználjuk a vegetativ táptalaj oltására. A beoltott vegetativ táptalajt 500 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikban inkubáljuk 29 °C hőmérsékleten, 48 órán át olyan zárt rázógépben, amely percenként 300-at fordul. Az inkubált vegetatív tenyészet 0,5 ml-ével 7 ml termelő táptalajt oltunk. A táptalaj összetétele a következő : összetevő Mennyiség (%) répamelasz 2,0 kukoricaliszt 1,5 halliszt 0,9 kukoricadara 0,9 nátrium-klorid 0,1 diammónium-hidrogén-foszfát 0,04 kalcium-karbonát 0,2 szójabab olaj (nyers) 3,0 ionmentes víz 91,36 A beoltott főfermentációs táptalajt 50 ml térfogatú lombikokban inkubáljuk 29 °C hőmérsékleten, 6 napon át, olyan zárt rázógépben, amely percenként 300-at fordul. B) A DOMM előállítása tankfermentorbam Nagymennyiségű inokulum előállítására az A) pontban megadottak szerint előállított 60 ml kiiiott vegetatív tenyészettel 40 1 második fokozatú vegetatív táptalajt oltunk. A táptalaj összetétele a következő: összetevő Mennyiség (%) kukoricalekvár 1,0 szójabab olajliszt 0,5 éiesztőkivonat 0,5 kalcium-karbonát 0,3 szójabab olaj (nyers) 0,5 lecitin (nyers) 0,015 víz 97,185 A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldat-tál 8,5-re állítjuk be. A második fokozatú vegetatív tenyészetet 68 liter össztérfogatú fermentorban tenyésztjük, 40 órán át, 29 °C hőmérsékleten, miközben levegőztetjük és keveijük a tenyészetet. 4 1 inkubált második fokozatú táptalajjal 44 l steril, alábbi összetételű főfermentációs táptalajt oltunk: összetevő Mennyiség (%) halliszt 0,875 kukoricaliszt 1,5 kukoricadara 0,875 kalcium-karbonát 0,2 nátrium-klorid 0,1 diammónium-hidrogén-foszfát 0,04 répamelasz 2,0 szójabab olaj (nyers) 3,0 lecitin 0,09 viz 91,32 A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 7,2-re állítjuk be. A beoltott főfermentációs táptalajt 68 1-es fermentorban tenyésztjük, 4 napon át, 28 °C hőmérsékleten. A táptalajon steril levegőt buborékoltatunk át, olyan mennyiségben, hogy az oldott oxigén értéke 30% és 50% között legyen, a keverőt 250 percenkénti fordulattal működtetjük. 2. példa A DOMM izolálása 38 1 összegyűjtött, teljes tenyészlevet, amit az 1. példában megadottak szerint állítunk elő, szűrési segédanyag jelenlétében szűrünk. A micéliumot vízzel mossuk, a mosófolyadékot hozzáadjuk a szűrlethez. A szűrlet pH-ját 25%-os, vizes nátrium-hidroxidoldattal 9,1 -re állítjuk be. 9 liter és 5 liter etil-acetáttal extraháljuk a szűrletet. Az etil-acetátos extraktumhoz 3500 ml ionmentes vizet adunk. Az óidat 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
