189504. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lutenizáló hormon felszabaduást gátló dekapeptid származékok előállítására
1 139 504 2 II. táblázat Peptid X R, r5 a20 UD (50%-os ecetsav, c= 1) 15. Ac dehidro-Pro D-Trp Leu Gly-NH2- 92,3° 16. Ac dehidro-Pro D-Trp “MeLeu Gly-NH2-110,5° 17. Ac dehidro-D-Pro D-Trp Leu Gly-NH2 + 5,2° 18. Ac dehidro-D-Pro D-Trp N“MeLeu Gly-NH2- 21,1° 19. Acr dehidro-Pro D-Trp N°MeLeu Gly-NH2- 69,0° 20. Ac dehidro-D-Pro D-Trp Leu NHCH2CH3 + 2,4 21. Ac Thz D-Trp Leu Gly-NH2 — 51,9 22. 23. 24. Ac Ac Ac Thz D-Thz D-Thz D-Trp D-Trp D-Trp N“MeLeu N°MeLeu Leu Gly-NH2 Gly-NH2 Gly-NH2- 79,0°- 46,5°- 17,7° + 18,2° + 18,2°- 41,3°- 7,7° 25. Ac dehidro-Pro (imBzl)D-His Leu Gly-NH2 26. Ac dehidro-D-Pro (imBzl)D-His Leu Gly-NH2 27. Ac Thz (imBzl)D—His Leu Gly-NH2 28. Ac D-Thz (imBzl)D-His Leu Gly-NH2 A II. táblázatban felsorolt peptideket in vitro és in vivo vizsgáljuk. Az in vitro próbához disszociált patkány-hipofizissejteket használunk, melyeket a 25 próba előtt 4 napig sejttenyészetben tartunk fenn. A peptidek alkalmazására válaszképpen kialakult LH-szinteket a patkány-LH-ra specifikus radoimmunpróbával határozzuk meg. A kontroll tenyészeteket tartalmazó csészékhez csak 3 nanomol 3Q LRF-et adunk, míg a kísérleti csészékhez 3 nanomol LRF-et plusz 1-100 nanomol vizsgálandó pepiidet adunk. A csak LRF-fel kezelt mintákban szekretált LH mennyiségét összehasonlítjuk a peptiddel plusz LRF-fel kezelt mintákban szekretált 35 LH-mennyiséggel. Az eredmények a IIA. táblázat In Vitro oszlopában láthatók, ahol a vizsgált peptid és az LRF molkoncentrációjának azon arányát adjuk meg (antagonista per LRF), amely a 3 nanomol LRF által felszabadított LH mennyiségének a 4n kontroll érték 50%-ára való csökkentéséhez szükséges (ICR50). Megvizsgáljuk a fent leírt peptidek nőstény patkányok ovulációját gátló hatásosságát is. E próbában négy, hét, kilenc vagy tíz érett, 225-250 g-os nőstény Sprague-Dawley patkánynak (egyéb megjelölés híján) kukoricaolajban felvett 0,02 mg peptidet fecskendezünk be déltájban a proösztrusz napján. A proösztrusz az ösztrusz (ovuláció) előtti délutánra esik. Kontrollként külön nőstény patkánycsoportot használunk, melynek nem adunk be o0 peptidet. Mindegyik kontroll nőstény patkánynál ovuláció következik be az ösztrusz idején. Amint az In Vivo oszlopban látható, a peptidek nagyon hatásosan gátolják a nőstény patkányok ovulációját igen alacsony dózisban adva, és valamennyi peptidkészítményt tökéletesen hatásosnak tartunk 1 mg dózis alkalmazásakor. IIA. táblázat Peptid In Vitro icr50 In Vivo Ovuláló patkányok 15. 0,043 0/10* 16. 0,058 0/7 17. 0,19 3/8 18. 0,27 5/10** 19. 0,03 0/9 20. 0,2 21. 0,14 5/8 22. 0,13 9/10** 23. 0.1 24. 0.12 25. 0,042 4/10 26. 0,2 10/10 27. 0,15 7/10** 28. 0,1 7/10** *0,025 mg **0,010 mg 3. példa A következő, X-R,-R2-D-Trp-Ser-Tyr-D-Trp- Rs-Arg-Pro-R6 általános képletü peptideket állítjuk elő az 1. példában általánosan leírt szilárd fázisú módszerrel.
