189504. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lutenizáló hormon felszabaduást gátló dekapeptid származékok előállítására

1

189 504

2

III. táblázat

Peptid

X

Ri

r2

r5

R*

a“ (50%-os ecetsav, c= 1)

29.

H

dehidro-DL-Pro

D-Phe

N“MeLeu

Gly-NH2

1

G/t

i

o

30.

H

dehidro-DL-Pro

D-Phe

Leu

Gly-NH2

31.

Ac

dehidro-DL-Pro

D-Phe

Leu

Gly-NH2-22,7 0

32. .

H

dehidro-DL-Pro

D-Phe

FTMeLeu

Gly-NH2

33.

Ac

Dehidro-Pro

D-Phe

Leu

Gly-NH2-77,7 °

34.

Ac

dehidro-D-Pro

D-Phe

Leu

Gly-NH2

35.

H

dehidro-Pro

D-Phe

Leu

Gly-NH2

36.

H

dehidro-D-Pro

D-Phe

Leu

Gly-NH2

37.

H

dehidro-Pro

D-Phe

Leu

NHCH2CH

3

38.

Bz

dehidro-Pro

D-Trp

Leu

G!y-NH2

39.

For

dehidro-Pro

D-Trp

Leu

Gly-NH2

40.

For

dehidro-Pro

D-His

Leu

Gly-NH2

4L

Acr

dehidro-Pro

D-His

Leu

Gly-NH2

42.

Bz

dehidro-Pro

Trp

Leu

Gly-NH2

A III. táblázatban felsorolt peptideket in vitro és in vivo vizsgáljuk. Az in vitro próbában disszociált patkány-hipofízissejtek 4 napos primer tenyészetét használjuk. A peptidek alkalmazására válaszképpen kialakult LH-szinteket a patkány-LH-ra specifikus radioimmunpróbával határozzuk meg. A kontroll tenyészeteket tartalmazó csészékhez csak 3 nanomol LRF-et adunk, míg a kísérleti csészékhez 3 nanomol LRF-et plusz 1-100 nanomol vizsgálandó pepiidet adunk. A csak LRF-fel kezelt mintákban szekretált LH mennyiségét összehasonlítjuk a pepiiddel plusz LRF-fel kezelt mintákban szekretált LH-mennyiséggel. Az eredmények a IIIA. táblázat In Vitro oszlopában láthatók, ahol a vizsgált peptid és az LRF molkoncentrációjának azon arányát adjuk meg (antagonista per LRF), amely a 3 nanomol LRF által felszabadított LH mennyiségének a kontroll érték 50%-ra való csökkentéséhez szükséges (ICRS0).

Megvizsgáljuk a fenti peptidek nőstény patkányok ovulációját gátló hatásosságát is. E próbában 225-250 g-os érett, nőstény Sprague-Dawley patkányoknak kukoricaolajban felvett 0,02 mg pepiidet fecskendezünk be déltájban a proösztrusz napján. A proösztrusz az ösztrusz (ovuláció) előtti délutánra esik. Kontrollként külön nőstény patkánycsoport szolgál, melynek nem adunk be peptidet. Mindegyik kontroll nőstény patkánynál ovuláció következik be az ösztrusz idején. Amint az In Vivo oszlopban látható, a peptidek nagyon hatásosan gátolják a nőstény patkányok ovulációját igen alacsony dózisban adva, és valamennyi peptidkészítményt tökéletesen hatásosnak tartunk 1 mg dózis alkalmazásakor.

IIIA. tablazat

Peptid

In Vitro

icr50

In Vivo

Ovuláló patkányok

29.

0,5 : 1

4/10

30.

0,8 : 1

7/10

31.

0,3 : 1

1/10

32.

0,4 : 1

2/10

33.

0,6 : 1

0/4*

*0.025 mg dózis

E peptidek emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan, orálisan, intranazálisan vagy intravaginálisan alkalmazhatók termékeny- 25 ség-gátlás és/vagy -szabályozás céljából. A hatásos dózisok az alkalmazás módjától és a kezelt emlős fajtájától függnek. Egy jellemző dózisforma például fiziológiás konyhasóoldatban oldott peptidből áll, melyet körülbelül 0,1-5 mg/testsúly-kg tarto- 30 mányban alkalmazunk. Orálisan a peptid szilárd vagy folyékony formában adható.

Bár a találmányt előnyös megvalósításának figyelembevételével írtuk le, mégis a szakember előtt nyilvánvaló módon változtatások és módosítások 35 hajthatók végre a találmány szellemétől való eltérés nélkül. így például a peptidkémiában ismert egyéb szubsztitúciók, amelyek nem csökkentik jelentősen a peptidek hatékonyságát, szintén alkalmazhatók a találmány szerinti peptidekben.

40

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás X-R,-R2-D-Trp-Ser-Tyr-R4-R5-Arg- 45 Pro-R6 általános képletű dekapeptid-származékok és farmakológiailag elfogadható savaddíciós sóik előállítására, ahol

X hidrogénatomot, 1-4 szénatomos alkanoil-,

2-5 szénatomos alkenoil- vagy benzoilcsoportot 50 jelent;

Rí jelentése dehidro-Pro, dehidro-D-Pro, dehidro-DL-Pro, Thz vagy D-Thz;

R2 jelentése D-Phe, 4-klór-D-Phe, diklór-D-Phe,

4-trifluor-metil-D-Phe, 4-fluor-D-Phe, difluor-D- 55 -Phe, 4-acetil-amino-D-Phe, 4-nitro-D-Phe, 4- -bróm-D-Phe, dibróm-D-Phe, 4-metil-tio-D-Phe,

4-metoxi-D-Phe vagy 4-metil-D-Phe;

R4 jelentése D-Trp vagy (imBzl)D-His;

Rs jelentése Leu vagy N“Me-Leu; és 60 R6 jelentése Gly-NH2 vagy — NHCH2CH3, azzal a feltétellel, hogy ha Rfi —NHCH2CH3 csoport, R, D Thz-től és R4 (imBzl)D-His-től eltérő, azzal jellemezve, hogy egyX‘-R,-R2-D-Trp-Ser(X2)-Tyr(X3)-R4-Rs-Arg(X4)-Pro-X5 általános képletü közben- 65 ső vegyületről, ahol

7