189504. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lutenizáló hormon felszabaduást gátló dekapeptid származékok előállítására
1 189 504 2 A találmány tárgya eljárás új peptidek előállítására, amelyek emlősöknél - beleértve az embert - gátolják a hipofízis (agyalapi mirigy) gonadotropin-termelését és visszaszorítják az ovuláció (érett tüsző felrepedése és a petesejt kiszabadulása) gátlására és/vagy szteroid hormonok leadását. Közelebbről meghatározva a találmány szerint olyan peptideket állítunk elő, amelyek gátolják az ivarmirigyek funkcióját és szteroid hormonok, mint progeszteron és tesztoszteron termelését. A hipofízis nyélen keresztül kötődik a hipotalamuszként ismert agyalapi részhez. A hipofízis két lebenyből áll, az elülső és a hátsó lebenyből. A hátsó lebeny tárolja és továbbítja az általános keringésbe a hipotalamuszban termelt két hormont, a vazopresszint és az oxitocint. A hipofízis elülső lebenye számos hormont termel, melyek komplex fehérje- vagy glükoprotein-molekulák ; ezek a véráramon át különböző szervekhez jutnak el, és serkentik a perifériás szerveket, hogy a véráramba hormonokat szekretáljanak. A hipofízis elülső lebenye termeli egyebek mellett a follikulust stimuláló hormont (FSH) és a luteinizáló hormont (LH), melyeket gonadotrop hormonoknak vagy gonadotropinoknak is neveznek. E hormonok együttesen szabályozzák az ivarmirigyek működését, amikor azok a herében tesztoszteront és a petefészekben progeszteront és ösztrogént termelnek, ezenfelül szabályozzák a gaméták (csírasejtek) termelését és érését is. Az agyalapi mirigy elülső lebenyének hormontermeléséhez általában a hipotalamuszban képződő más hormoncsoport előzetes felszabadulása szükséges. A hipotalamuszhormonok egyike olyan faktorként hat, amely megindítja a gonadotrop hormonok, főleg az LH felszabadulását. Az LH számára felszabadító faktorként („releasing factor”) ható hipotalamusz-hormonte leírásban LRF- nek nevezzük („LH-releasing factor”), bár az LHRH és GnRH megjelölés is használatos. Az LRF-et a következő szerkezetű dekapeptidként izolálták és jellemezték: p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2. A peptidek két vagy több aminosavat tartalmazó vegyületek, melyekben az egyik aminosav karboxilcsoportja a másik aminosav aminocsoportjához kapcsolódik. Az LRF fenti képlete összhangban áll a peptidek szokásos jelölésével, ahol az aminocsoport a bal oldalon és a karboxilcsoport a jobb oldalon helyezkedik el. Az aminosavmaradék helyzetének azonosítása céljából az aminosavmaradékokat balról jobbra menve számozzák. Az LRF esetében a glicin karboxilcsoportjának hidroxilrészét aminocsoport (NH2) helyettesíti. A fenti aminosavmaradékok rövidítései szokványosak a peptidkémiában és az aminosavak triviális nevén alapulnak; így p-Glu = piroglutaminsav His = hisztidin Trp = triptofán Ser = szerin Tyr = tirozin Gly = glicin Leu = leucin Arg = arginin és Pro = prolin. . (Egyéb, a leírásban meg nem adott rövidítések: Thz = meta-tiazolidin-2-karbonsav Alá - alanin Phe = fenil-alanin Me = metil im Bzl = a His iminocsoportjához kapcsolódó benzilcsoport). A találmány szerinti peptidek aminosavai a glicin kivételével L-konfigurációjúak, ha erre nézve külön utalás nincs. Ismeretes, hogy ha az LRF dekapeptid 6-helyzetében a Gly-t D-aminosavak helyettesítik, a kapott peptid anyag emlősöknél mintegy 1-35-szörösen serkenti az LH és egyéb gonadotropinok hipofízis általi leadását. E felszabadító hatás létrehozható, ha emlősöknek intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan, orálisan, intranazálisan vagy intravaginálisan alkalmazzák az LRF-analógot. Az is ismeretes, hogy az LRF dekapeptid 2-helyzetében a His különböző aminosavakkal való helyettesítése (vagy a His elhagyása) olyan analógokat eredményez, melyek emlősöknél gátolják az LH és más gonadotrop hormonok hipofízis általi leadását. Közelebbről, az LH-felszabadulás változó mértékű gátlása érhető el, ha a His-t elhagyjuk (dez-His), vagy D-Ala, D-Phe vagy Gly által helyettesítjük. A 2-helyzetben módosított ilyen peptidek gátló hatása tovább fokozható, ha a dekapeptid 6-helyzetű Gly-jét D-aminosav helyettesíti. Például a p-Glu-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro- Gly-NH2 peptid négyszer hatásosabban gátolja a gonadotropinok felszabadulását, mint a hasonló peptid, ahol inkább Gly, mint D-Ala van jelen a 6-helyzetben. Egyes nőstény emlősök, melyeknek nincs ovulációs ciklusuk és nem rendelkeznek hipofízis- vagy petefészek-rendellenességgel, normális mennyiségű LH és FSH gonadotropint kezdenek szekretálni LRF megfelelő alkalmazása után. így az LRF alkalmasnak látszik terméketlenség kezelésére olyan esetekben, ahol a hipotalamuszban működésbeli defektus áll fenn. Sokszor nőstény emlősöknél az ovuláció megakadályozása kívánatos; ez olyan LRF-analógok alkalmazásával érhető el, amelyek antagonizálják az LRF normális funkcióját. Ebből a célból kiterjedten tanulmányozzák az LRF-antagonista LRF- analógok fogamzásgátlásra vagy a fogamzási periódusok szabályozására való esetleges alkalmazását. Olyan peptidek létrehozása lenne kívánatos, amelyek hatásos antagonistái az endogén LRF-nek és emlősöknél megakadályozzák az LH szekrécióját és az ivarmirigyek szteroid-termelését. A találmány céljául annak a feladatnak a megoldását tűztük ki, hogy emlősöknél - beleértve az embert - gonadotropin-felszabadulást gátló peptideket állítsunk elő és eljárást dolgozzunk ki hím és nőstény emlősök ivarmirigyei szteroid-termelésének gátlására. A találmány szerint tökéletesített LRF-analógok hatásos LRF-antagonisták és gátolják az emlősök szaporodási folyamatát. A találmány szerinti analógok a gonadotropinok és szexuálhormonok képződésének gátlására használhatók í 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
