189504. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lutenizáló hormon felszabaduást gátló dekapeptid származékok előállítására
1 ,189 504 különböző körülmények között, beleértve a korai nemi érést, hormon-dependens rosszindulatú daganatokat, menstruációs zavarokat és a méhnyálkahártya szabálytalan elhelyezkedésével járó állapotot (endometriózis). Általában a találmány szerint olyan peptideket szintetizálunk, amelyek erősen gátolják emlősöknél - beleértve az embert - a gonadotropinok hipofízis általi szekrécióját, és/vagy gátolják az ivarmirigyek szteroidleadását. E peptidek olyan LRF-analógok, ahol 1-helyzetű szubsztitúciót alkalmazunk dehidroprolin vagy meta-tiazolidin-2-karbonsav formájában, és előnyösen a 2-, 3- és 6-helyzetben is szubsztituensek vannak jelen. Az 1-helyzetű szubsztituens módosítható, úgyhogy a-aminocsoportja acilcsoportot, mint formil-, (Fer) acetil-, (Ac) akrilil-, (Acr) vinil-acetil- vagy benzoil(Bzl)csoportot tartalmaz. Az 1-helyzetben előnyös a dehidro-L-Pro alkalmazása. A 2-helyzetben előnyösen D-Phe található, ami a benzolgyürű specifikus módosítása következtében fokozott antagonista aktivitást eredményez. Hidrogénatomot egyszeresen előnyösen a para- vagy 4-helyzetben, és kétszeresen előnyösen a 2,4- vagy a 3,4-helyzetben helyettesítünk. Szubsztituensekként előnyösen diklór-, metilcsoportot, fluoratomot, difluor-, trifluormetil-, metoxicsoportot, brómatomot, dibróm-, nitro-, dinitro-, acetil-amino- és metil-merkaptocsoportot alkalmazunk. A 3-helyzetben D-Trp és a 6-helyzetben imBzl D-His vagy D-Trp foglal helyet. A 7- és 10-helyzetben a szubsztitúció tetszőleges. Minthogy ezek a peptidek igen hatásosan gátolják az LH-felszabadulást, gyakran LRF-antagonistáknak nevezik őket. E peptidek nőstény emlősöknél gátolják az ovulációt, ha igen alacsony dózisszinten az ivarzás előtti ciklusban (proösztrusz) alkalmazzuk őket, és kiváltják a megtermékenyített peték reszorpcióját és röviddel a fogamzás után alkalmazva. Közelebbről meghatározva a találmány szerinti peptidek a következő általános képlettel ábrázolhatok : X-R,-R2-D-Trp-Ser-Tyr-R4-R5-Arg-Pro- R6, ahol X hidrogénatomot, 1-4 szénatomos alkanoil-, 2-5 szénatomos alkenoil- vagy benzoilcsoportot jelent; Rt jelentése dehidro-Pro, dehidro-D-Pro, dehidro-D-Pro, Thz vagy D-Thz; R2 jelentése D-Phe, 4-klór-D-Phe, diklór-D-Phe, 4-trifluor-metil-D-Phe, 4-fluor-D-Phe, difluor-DPhe, 4-acetil-amino-D-Phe, 4-nitro-D-Phe, 4- bróm-D-Phe, dibróm-D-Phe, 4-metil-tio-D-Phe, 4- metoxi-D-Phe vagy 4-metil-D-Phe; R4 jelentése D-Trp vagy (imBzl)D-His; R5 jelentése Leu vagy N“-Me-Leu; és R6 jelentése Gly-NH2 vagy—NHCH2CH, azzal a feltétellel, hogy ha R6 — NHCH2CH3 csoport, R, D-Thz-től és R4 (imBzl)-D-His-től eltérő. Dehidro-Pro alatt 3,4-dehidroprolint értünk (C5H702N), és ha X acilcsoportot jelent, úgy a dehidroprolin a nitrogénatomhoz kapcsolódik. A Thz meta-tiazolidin-2-karbonsavat (C4H702NS) jelent, mely cisztein-hidrokloridból állítható elő formaldehides kezeléssel; Ac-Thz-t például úgy ál-Htunk elő, hogy Thz-t ecetsavanhidriddel reagáltatunk. A találmány szerinti peptidek szilárd fázisú peptidszintézissel állíthatók elő, a peptidkémiában szokásos, célszerűen klórmetilezett gyantát, metilbenzhidril-amin-gyantát (MBHA) vagy benzhidrilamin-gyantát (BHA) használva. A szintézist lépésenkénti módszerrel hajtjuk végre, a láncot egyenként növelve a soron következő aminosav hozzákapcsolásával (az eljárást részletesen ismerteti a 4 211 693 számú amerikai szabadalmi leírás). Előnyösen oldallánc-védő csoportokat - amelyek a peptidkémiában jól ismertek - adunk a Ser, Tyr, Arg és His aminosavakhoz, mielőtt hozzákapcsolnánk őket a gyantán épülő lánchoz. Az ilyen eljárás teljesen védett intermedier peptid-gyantát eredményez. A találmány szerinti intermedierek a következő általános képlettel szemléltethetők: XI-R,-R2-D-Trp-Ser(X2)-Tyr(X3)-R4-Rs-Arg(X4)-Pro-Xs, ahol X1 olyan típusú a-amino-védöcsoport, melynek használatát a szakember jól ismeri peptidek lépésenkénti szintézisénél; ha az előállítandó peptidben X acilcsoportot jelent, úgy az illető acilcsoport használható védöcsoportként. Az X' jelentésének megfelelő a-amino-védőcsoportok osztályaiba tartoznak (1) acil-típusú védőcsoportok, mint a formilcsoport (For), trifluor-acetil-, ftalil-, p-toluolszulfonil(Tos), benzoil- (Bzl), benzolszulfonil-, o-nitro-fenilszulfenil- (Nps), tritil-szulfenil-, o-nitro-fenoxiacetil-, akrilil- (Acr), klór-acetil-, acetil- (Ac) és y-klór-butiril-csoport; (2) aromás uretán-típusú védőcsoportok, például benzil-oxi-karbonil- (Z) és szubsztituált benzil-oxikarbonil-, mint p-klór-benzil-oxi-karbonil-, pnitro-benzil-oxi-karbonil-, p-bróm-benzil-oxikarbonil- és p-metoxi-benzil-oxi-karbonil-csoport; (3) alifás uretán-típusú védöcsoportok, mint terc-butil-oxi-karbonil- (Boc), diizopropil-metoxikarbonil-, izopropil-oxi-karbonil-, etoxi-karbonil- és allil-oxi-karbonil-csoport; (4) cikloalifás uretán-típusú védőcsoportok, mint ciklopentil-oxi-karbonil-, adamantil-oxikarbonil- és ciklohexil-oxi-karbonil-csoport; (5) tiouretán-típusú védőcsoportok, mint feniltio-karbonil-csoport ; (6) alkil-típusú védőcsoportok, mint allil (Aly), trifenil-metil- (tritil-) és benzilcsoport (Bzl); (7) trialkil-szilán-csoportok, mint trimetil-szilán. Előnyös a-amino-védőcsoport a Boc, ha X hidrogénatomot jelent. X2 a Ser alkoholos hidroxilcsoportjának védőcsoportja, és jelentése acetil-, benzoil-, tetrahidropiranil-, terc-butil-, tritil-, benzil- vagy 2,6-diklórbenzil-csoport. Előnyben részesítjük a benzilcsoportot. X3 a Tyr fenolos hidroxilcsoportjának védőcsoportja és jelentése tetrahidropiranil-, terc-butil-, tritil-, benzil-, benzil-oxi-karbonil-, 4-bróm-benzilo> i-karbonil- vagy 2,6-diklór-benzil-csoport. X4 az Arg nitrogénatomjának védőcsoportja és jelentése nitro-. Tos, benzil-oxi-karbonil-, adamantil-oxi-karbonil-csoport vagy Boc; X4 azonban hidrogénatom is lehet, ami azt jelenti, hogy nincsenek 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
