189444. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákos megbetegedések és más hasonló immunzavarokon alapuló betegségek diagnosztizálására alkalmas vakcina és hiperimmun szérum előállítására
1 .189 444. 2 vagy más hasonló immunzavaron alapuló betegségben szenved-e és az állapota milyen súlyos. Ha ugyanis a beteg vérszérumában sok a blokkolóanyag és kevés az ellenanyag, akkor súlyos az állapot, ha pedig a beteg gyógyul, kevés a blokkolóanyag és nő az ellenanyag mennyisége. Azt, hogy a beteg szenved-e rákos megbetegedésben vagy más hasonló immunzavaron alapuló betegségben, úgy állapítjuk meg, hogy ismert betegségben szenvedő betegtől származó vérből a találmány szerinti eljárással készített hiperimmun szérumot géldiffúziós, immuntusfestéses vagy immunfluoreszcens módszerrel összehozunk a beteg szérumával. Ha a reakció pozitív, például precipitációs vonal keletkezik a géldiffúziós módszer esetében, ez azt jelenti, hogy van a szérumban a hiperimmun szérumnak megfelelő blokkolóanyag, tehát a beteg valóban a hiperimmun szérumnak megfelelő betegségben szenved. Negatív reakció esetén a próbát egyéb, ismert betegségben szenvedő betegtől származó vérből készített hiperimmun szérummal is elvégezzük. Ezután a beteg szérumából sorozathígításos módszerrel ismert módon meghatározzuk a blokkolóanyag titerét. A beteg szérumában levő ellenanyag mennyiségét úgy határozzuk meg, hogy ismert betegségben szenvedő betegtől származó vérből a találmány szerinti eljárással előállított vakcinát hozunk össze géldiffúziós, immuntusfestéses vagy immunfluoreszcens módszerrel a beteg szérumával. Ha a reakció pozitív, ez ellenanyag jelenlétét mutatja. Ezután a beteg szérumából sorozat-hígításos módszerrel, ismert módon meghatározzuk az ellenanyag titerét. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa Vakcina készítése 25 mg tripszint feloldunk 5 ml fiziológiás nátriumkloridoldatban, és a kapott oldat 0,5 ml-ét hozzáadjuk ismert betegségben szenvedő beteg vérének 3 ml-éhez, amelyhez alvadásgátlóként 0,3 mg heparint adtunk. Ezután 3 napon át +15 °C hőmérsékleten inkubáljuk, majd hozzáadunk 3 ml normál vért, és 7 napon át +15 °C hőmérsékleten újra inkubáljuk. Ezt követően a felülúszó szérumot dekantáljuk, hozzáadjuk a fenti tripszin-oldat 1 ml-ét, és 4 napon át + 15 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Ezután 10 ml vérszérumhoz 1 ml 5%-os fenol-oldatot adunk és a mintát 45 percen át 40 °C hőmérsékleten, majd 2 percen át 97 °C hőmérsékleten tartjuk. Végül azonos térfogatmennyiségű Freund-féle komplett adjuvánst, valamint 1 ml 1 %-os Levamisolt és 1 ml 1%-os Imuránt adunk hozzá vizes oldatban. 2. példa Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban tripszin helyett papaint alkalmazunk oly módon, hogy 25 mg papain enzimkészítményt 5 ml fiziológiás nátriumklorid-oldatban feloldunk, és ennek az oldatnak 0,5, majd 1 ml-ét adjuk a mintához. 3. példa Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban tripszin helyett elasztázt alkalmazunk. r 1200 E elasztázt (1 ampulla) 5 ml desztillált vízben feloldunk, és az oldat 0,5, majd 1 ml-ét adjuk a fenti módon a mintához. 4. példa Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban tripszin helyett pepszint alkalmazunk, amelyből 2%-os vizes oldatot készítünk, ennek az oldatnak 0,5, majd 1 ml-ét adjuk az ismertetett módon a mintához. 5. példa Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban tripszin helyett kimotripszint alkalmazunk. 2 mg Quimatrose-t a-kimotripszint 10 ml desztillált vízben feloldunk, és ennek az oldatnak 0,5, majd 1 ml-ét adjuk az ismertetett módon a mintához. 6. példa Az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban tripszin helyett 0,5 ml, majd 1 ml 3 %-os vizes triklórecetsav-oldatot adunk az ismertetett módon a mintához. 7. példa Hiperimmun szérum készítése Az 1. példa szerinti módon készített, adjuvánssal kiegészített vakcina 2 ml-ét embernek, 2 alkalommal, 7-napos időközönként intramuszkulárisan beadjuk. A második beadást követő második napon vért veszünk, a vérszérumot dekantálással elválasztjuk, 10 ml vérszérumra számítva 1 ml 5%-os fenol-oldatot adunk hozzá és 2 percen át 100 °C hőmérsékleten tartjuk. Annak bizonyítására, hogy a találmány szerinti eljárással előállított hiperimmun szérum segítségével felállított diagnózis eredményei megbízhatóbbak, mint a röntgen, citológiai és operáció előtti szövettani vizsgálatok eredményei, az alábbi táblázatban összefoglaljuk 6 megoperált paciens különböző módokon meghatározott diagnózis adatait. A táblázatban + és — jellel jelöltük a pozitív és negatív diagnózist. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
