189444. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rákos megbetegedések és más hasonló immunzavarokon alapuló betegségek diagnosztizálására alkalmas vakcina és hiperimmun szérum előállítására
1 .189 444 2 A találmány tárgya eljárás rákos megbetegedések és különböző okok miatt kialakuló, hasonló immunzavarokon alapuló betegségek, így például hepatitis, colitis, trombophlebitis diagnosztizálására alkalmas vakcina és hiperimmun szérum előállítására. A találmány továbbá egy diagnosztikai eljárás rákos és más, hasonló, immunzavarokban szenvedő betegek vérében levő antigén (blokkolóanyag) és ellenanyag minőségének és mennyiségének a meghatározására. Az.immunzavarokon alapuló, különösen a daganatos betegségek kezelésében nagy szerepet játszik az, hogy a betegséget mikor fedezik fel, tehát a betegség milyen stádiumában kezdik meg a beteg kezelésit. Ezért világszerte nagy érdeklődés nyilvánul meg az ilyen betegségek diagnosztizálására alkalmas készítmények iránt. A találmány célja, hogy olyan diagnosztikai készítményt nyújtson, amely egyrészt alkalmas annak eldöntésére, hogy a beteg szenved-e ilyen betegségben, másrészt az is megállapítható a segítségével, hogy az állapota milyen súlyos. A daganatos megbetegedések kutatásában a legutóbbi években az ilyen megbetegedésben szenvedők vérében jelen levő ún. blokkolóanyagok felé terelődött az érdeklődés. Rous F. P. és Galló R. C. a daganatkeltő vírusok néhány formáját tisztázták. Megfigyelték, hogy amikor a daganat klinikailag megjelenik, blokkolóanyagok vannak jelen a vérében, amelyek kötődnek a macrophághoz, T sejthez, trombocytákhoz és a daganatokhoz. Megakadályozzák a macrophág és T lymphocyták daganat pusztító hatását, majd a trombocyták blokkolása révén a fehérvérsejtek és B lymphocyta működésének csökkenését, továbbá a daganat lefedése által taszítják a lymphocytákat, így elősegítik a daganat növekedését és szóródását. Ha a daganatot műtétilag el is távolítják, éveken át nagy koncentrációban találhatók meg a vérben. Ezért van meg a lehetőség a daganatos megbetegedés kiújulására. Ismertek már rák diagnosztizálására szolgáló immunológiai módszerek. így például a 942 668 számú kanadai és a 3 960 827 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint karcinoembrionális antigéneket állítanak elő és ezeket használják rák diagnosztizálására. A karcinoembrionális antigének azonban nem minden tumoros egyénnél jelennek meg és nem tumoros egyének esetében is előfordulhatnak, ezenkívül a tumorra sem specifikusak, így alkalmazásuk nem nyújt biztos eredményt. Ezért olyan készítményre van szükség, amely tumorspecifikus és amelynek alkalmazása biztos eredményt szolgáltat. A találmány alapját az à felismerés képezi, hogy rákos vagy hasonló immunzavaron alapuló betegségben szenvedő beteg blokkolóanyagot tartalmazó vérmintájából olyan vakcina és ennek segítségével olyan hiperimmun szérum állítható elő, amely eredményesen használható az ilyen betegség diagnosztizálására. A találmány tárgya eljárás rákos megbetegedések vagy különböző okok miatt kialakuló hasonló immunzavarokon alapuló betegségek diagnosztizálására alkalmas vakcina előállítására, ahol úgy járunk el, hogy a beteg alvadásgátlóval ellátott vérmintájában vagy pedig hasonló rákos megbetegedésben vagy immunzavaron alapuló betegségben szenvedő betegtől származó, alvadásgátlóval ellátott vérmintában a fehérjéket részlegesen vagy teljesen lebontjuk vagy kicsapjuk, ezután a mintát 2-5 napon át 10-20 °C-on inkubáljuk, majd a vörösvérsejteket adott esetben eltávolítjuk, a mintához 0,1-3 :6 arányban normál, alvadásgátlóval ellátott humán- vagy állatvért adunk, 5-10 napon át 10-20 'C-on újra inkubáljuk, majd ezt követően a vörösvérsejteket eltávolítjuk, a szérumban a fehérjéket részlegesen vagy teljesen lebontjuk vagy kicsapjuk, a szérumot 3-5 napon át 10—20 °C-on inkubáljuk, ezután ismert módon konzerváljuk; állatvér alkalmazású esetén ismert módon albuminmentesitjük, majd 30-60 percen át 37-56 ’C-on inkubáljuk, ezt követően 1-3 percen át 95-100 °C hőmérsékleten tartjuk, végül valamely ismert adjuvánst és kívánt esetben valamely ismert elölt baktériumtörzs kultúrát vagy annak kivonatát és/vagy valamely immunstimuláns vagy immunszupresszív hatású ismert anyagot adunk hozzá. A vérmintában a fehérjék részleges vagy teljes lebontását célszerűen valamely fehérjebontó enzimmel, így tripszinnel, kimotripszinnel, papainnal, elasztázzal vagy pepszinnel végezzük. A fehérjék kicsapására célszerűen triklórecetsavat használunk. A konzerválást előnyösen fenollal vagy mertioláttal (nátrium-etil-higany(II)-tioszalicilát) végezzük. Állatvér alkalmazása esetén a szérumot ismert módon albuminmentesitjük, célszerűen alkoholos kirázással. Adjuvánsként bármilyen ismert adjuvánst használhatunk, előnyösen Freund-féle komplett vagy inkomplett adjuvánst. Az inkomplett adjuváns vízolaj emulzió, a komplett adjuváns pedig víz-olaj emulzión kívül elölt Mycobacterium tuberculosist is tartalmaz. Baktériumtörzs kultúraként előnyösen a Streptococcus törzsből készített kivonat jön szóba, immunstimuláns hatású anyagként előnyös a Levamisol (L-6-fenil-2,3,5,6-tetrahidroimidazo- 2,1-btiazol) vagy valamely sója és immunszupresszív anyagként az Immurán [6-(l-metil-4-nitroimidazol-5-il-tio)-purin]. A kapott vakcinából a találmány értelmében úgy állítunk elő hiperimmun szérumot, hogy az adjuvánssal kiegészített vakcina 1-2 ml-ét embernek vagy állatnak 7-14 napos időközönként 1-3 alkalommal intramuszkulárisan beadjuk, majd az utolsó beadást követő 1-4. napon vért veszünk, a vérszérumot elválasztjuk, a fehérjéket ismert módon konzerváljuk, ha a szérumot állatban termeltük, a kapott szérumot ismert módon albuminmentesitjük, végül a szérumot 1-3 percen át 95-100 °C hőmérsékleten tartjuk. Amint a fentiekben már említettük, a beteg vérszéruma blokkolóanyagot és ellenanyagot is tartalmaz. A betegség előrehaladásakor a blokkolóanyag mennyisége nő, az ellenanyagé ugyanakkor csökken vagy megszűnik. A találmány tárgyát képező diagnosztikai készítmények segítségével megállapítható, hogy a beteg rákos megbetegedésben, ha igen, annak melyik fajtájában, illetve típusában 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
