189415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-alkil-androszta-1,4-dién-3,17-dionok, továbbá ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

189 415

A találmány az (I) általános képletű 1-alkilandroszta-l,4-dién-3,17-dionokra, pontosabban az ilyen vegyületek, valamint az említett (I) általános képletű vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására szolgáló eljárásokra vonatkozik.

Az (I) általános képletben

R, metilcsoport, etilcsoport, hidroxi-metilcsoport, 1-3 szénatomos alkoxi-metil-csoport vagy

1-4 szénatomos alkanoil-oxi-metil-csoport;

Re jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport és

R7 hidrogénatomot, vagy pedig 7a- vagy 7ßhelyzetben álló metilcsoportot képvisel.

Azt találtuk, hogy az (I) általános képletű új vegyületek gátolják az ösztrogének bioszintézisét. Ez a tény meglepő, mivel a megfelelő és 1-helyzetben helyettesitetlen androszta-l,4-dién-3,17- . dionok az ösztrogénszintet jelentős mértékben növelik.

Az ösztrogének bioszintézisénél fontos szerepe van annak az átalakulásnak, melynek során androgénekből ösztrogének keletkeznek. Ez az átalakulás egy reakciósorozaton keresztül következik be, ezt a reakciósorozatot összefoglalóan „aromatizálásnak” vagy „aromatizálódásnak” szokták nevezni. Az androszténdionnak és a tesztoszteronnak ösztronná és ösztradiollá történő átalakulásánál az aromatáz az az enzim, amely az átalakulás sebességét meghatározza.

A találmány szerinti vegyületeket az aromatáz hatásának gátlására, valamint az endokrin-farmakológiai mellékhatásokra nézve vizsgáltuk;

A: 4-hidroxi-4-androsztén-3,17-dion (a vegyület összehasonlításra szolgált az aromatázgátló hatás és az ösztrogén hatás vizsgálatánál, valamint a herenövekedés gátlásának meghatározásánál),

B : 1 -metil-androszta-1,4-dién-3,17-dion,

C : 1,7a-dimetil-androszta-l ,4-dién-3,17niion,

D : 1,6a-dimetil-androszta-1,4-dién-3,17-díon.

1. Az aromatázgátló hatás vizsgálata patkányokon PMSG-teszttel

A fenti A, B, C és D jelű kísérleti anyagokat arra nézve vizsgáltuk, hogy miként befolyásolják a PMSG által stimulált ösztrogéntermelést (PMSG = Pregnant Mare Serum Gonadotropin). Az ösztradiol kiválasztását a PMSG-kezelés fokozza (kontrollok), amit aromatázgátlókkal csökkenteni lehet.

20 napos nőstény patkányokat másodnaponként, összesen hét alkalommal, esetenként 100 NE (I. U.) PMSG-vel kezeltünk, a PMSG-t szubkután injekcióval adtuk be. A kísérleti anyagot az utolsó PMSG-kezelés előtt és 8 órával az utolsó kezelés után (d,z) adtuk be az állatoknak. A beadás injekcióval történt. A kontrollállatok csupán hordozóanyagot tartalmazó injekciót kaptak. Az utolsó PMSG-dózis beadását követően 24 óra múlva a kísérleti állatokat leöltűk és radioimmunológiai módszerrel meghatároztuk a szérumban az ösztradiolt, majd annak kondenzációját és a standard eltérést nmól/liter dimenzióban fejeztük ki.

A kontrollokhoz képest kapott különbségek szignifikanciáját varianciaanalízissel vizsgáltuk,

míg a hatás erősségét regresszió-/kovarianciaanalízissel határoztuk meg.

/. Táblázat

PMSG-vel előkezelt patkányok perifériás szérumában levő ösztradiol koncentrációjának befolyásolása

10

Dózis

ösztradiol-Relatív hatáserősség (A = 1,0)

mg/állat

n

koncentráció

2 x s. c.

mmól/liter

15

PMSG-kont(0,2 ml hordo-10

4,25 ±1,57

rollok

Z0-anyag)

0,1

10

4,31 ±1,78

20

A

0,3

10

3,19 ± 1,31

1,0

A

1,0

10

1,58 ±0,92*

3,0

10

1,52 ±0,74*

0,1

10

3,53 ±1,84

25

B

0,3

1,0

10

10

2,92 ± 1,09 1,80± 1,13*

1,3

3,0

10

0,78 ±0,18*

0,1

10

2,21 ±1,05*

r

0,3

10

0,81 ±0,32*

6,3

30

t

1,0

10

0,49 ±0,21*

3,0

10

0,37±0,11*

0,1

10

3,73 ±0,89

D

0,3

10

2,78 ±1,17

1,2

1,0

10

1,78 ±0,67*

35

3,0

10

1,02 ±0,38*

* = szignifikáns különbség a PMSG-kontrollokhoz képest n = a kísérleti állatok száma egy-egy csoportban.

4Q A fenti 1. Táblázat igazolja, hogy a találmány szerinti B, C és D jelű vegyületek az A jelű összehasonlító vegyülettel azonos módon csökkentik a PMSG által fokozott ösztradiol-koncentrációt a patkányok perifériás szérumában. Ez a hatás függ

4g az alkalmazott dózistól. A kísérleti vegyületek közül a B és a D jelű vegyület hatásának erőssége körülbelül az A jelű összehasonlító vegyületével azonos, míg a C jelű vegyület mintegy hatszor hatásosabb az A jelű összehasonlító vegyületnél.

50

2. Az ösztrogén hatás vizsgálata egereken és patkányokon uterus! vagina növekedési teszttel

200 g testsúlyú ovarektomizált nőstény patkányoknak, illetőleg 30 g testsúlyú ovarektomizált nőstény egereknek 5 napon keresztül, naponta egy alkalommal, szubkután injekcióval beadtuk a kísérleti vegyületeket (ovarektomizált azt jelenti, hogy az állatok petefészkét előzőleg műtéti úton eltávolítottuk). A kontrollálatoknak csupán hordozóanyagot adtunk be.

80 Az utolsó kezelés után egy nappal az állatokat leöltük, majd méhüket és hüvelyüket azonnal kipreparáltuk és ezen szervek súlyát megmértük.

Minden egyes csoportban meghatároztuk a szervek súlyának középértékét és a standard eltérést.

2