189222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, fertőző bronchitis elleni vakcina előállítására

1

189 222

2

rummal: Az eredményeket a 4. Táblázat tartalmazza.

Adalékok

HA + /Kezeletlen AAF

. +

AAF + SPF csirke-szérum

+

AAF + fajlagos FBV antiszérum (207.

típusú)

—

AAF + fajlagos NDV antiszérum

+

NDV = Newcastle betegség vírusa

B. Mivel az új FB vírusok hemagglutinint hor- 15 doznak, (amint ez bromelines kezeléssel kimutatható) és különböző szerotípusokhoz tartoznak, a hemagglutinálási tesztet használhatjuk az új vírusok közötti megkülönböztetés céljából.

Az alkalmazott módszert Alexander D. J. és 20 munkatársai írták le [Avian Pathology J, 125-134 (1976)]. A foszfolipáz C-t használták a megfelelő antigén kezelésére.

Az így nyert titert 2 logaritmusában fejezzük ki.

Az adatokat az 5. Táblázat tartalmazza. 26

VII. Példa

Vakcinációs kísérletek SPF csirkékkel

A. A vírusok szaporítása és a vakcinák készítése

D 207 vírustörzset [nem hemagglutináló (HA - )]

és D 274 törzset [hemagglutináló (HA + )] tenyésztünk SPF tojásokban 54, illetve 52 passzálással legyengítve. Ezekből a legyengített vírus törzsekből a vakcinákat a III. példa szerinti módszerrel készítjük.

B. Vakcinálás

Csoportonként 10-10 csirkéből álló 2 csoport 6 hetes SPF csirkét vakcinálunk szemcseppekkel,

4,0 log EID50 mennyiséggel a megfelelő, A. részben említett vakcinákkal. A tyúkokat izolátorban helyezzük el és szérum-vizsgálatokra vért veszünk tőlük hetenkénti intervallumban. Ezeknek a szérumoknak a Hl titerét a VI. példa B. részében leírt módszer szerint határozzuk meg, FBV D 274-ből készített antigént használva. Az eredmények a 6. Táblázatban találhatók, megmutatva a D 274 antigének elleni immunizálás kifejlődését 12 héten át a vakcináit tyúkok két csoportjában; nem vakcináit tyúkok szintén részt vettek a vizsgálatban.

5. Táblázat

ANTIGÉN AZ

FBV- M 41 BŐL

D 274

D 1466

30

(szerotípus)

i SZÉRUM

(Mass.) (Mass.)

(212)

H 52 (Mass.)

9

6

5

35

207

6

10

5

212

5

5

8

246 G (Mass.)

10

5

ND

6.

Táblázat

Hetek száma a vakcinálás után

Vakcina

0 1

2

3

4 6 7

8 9

10

11

12

207 (HA-)

4,0 5,4

6,2

5,9

6,6 4,8 4,2

5,5 5,8

5,2

4,1

5,2

274 (HA + )

4,7 7,5

8,2

8,7

8,2 10,0 9,3

10,0 10,1

9,5

8,8

9,3

kontroll

./ <5

A vakcináit tyúkok fentivel azonos két csoportjának szérumában a semlegesítő választ ( > 4,0 log) vizsgáljuk D 274 (52-szer passzált) homológ törzse ellen. A választ mutató állatok számát (a 10 vakcináit állatból) a 7. Táblázat tartalmazza.

7. Táblázat

Hetek száma a

Vakcinacsoport

vakcinálás után

207 (HA-) 274 (HA + )

3

■ ! 7/10*

9/10*

12

5/10

9/10

C. Emlékeztető fertőzési kísérletek 20 héttel a vakcinálás után a kotlósok vakcináit és nem-vakcináit csoportját megfertőzzük 4,0 log EIDjo mennyiségű D 274 (52-szer passzált) törzszsel. A megfertőzés után 4 nappal a madarakból légúti metszetet készítünk az immunfluorescens (IFT) szövettani vizsgálathoz, a vizsgálathoz standard technikát alkalmazva. A madarak számát (a 10 vakcinákból), amelyek kóros mikroszkópos elváltozást vagy pozitív IFT-t mutatnak, a 8. Táblázat mutatja be.

65

6