189222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, fertőző bronchitis elleni vakcina előállítására
1 2 189 222 2. Táblázat ANTISZÉRUM —► i VÍRUSTÖRZS Massachussets D-207 D-212 Connecticut M 41 (Mass.) + +- -— — D-274 — — + + — • — '—. 249 G — + + —------246 G + + — —----• D-212 — — — + + — D-580 — — — + + Connecticut — “T- — ■'---+ + + + : 1 : 16 hígítású fajlagos antiszérum, amely a ±40 tarfolt teljes csökkenését idézi elő; — : ugyanez az antiszérum nem okoz jelentős tarfoltszám csökkenést. 3. Táblázat Az egy vagy több új szerotípus elleni antitestekkel rendelkező-csapatok ■ százalékos száma A D 207 D 212 Szerológiai vizsgálat 61% 32% 197 vizsgált csapat Az osztályozott izolátumok száma B Mass. D 207 D 212 Vírus-izolálás 9 29 4 52 csapatból A H-vakcina törzsektől elkülönítés nélkül. Az új vírusokból inaktivált vakcina készítése érdekében az AAF-et vagy szövet-tenyészet folyadékot lehet inaktiválni pl. formaldehiddel vagy ßpropiolaktonnal. Az inaktiválás és ha szükséges, pH beállítás és az inaktiváló ágens semlegesítése után az inaktivált antigént adjuvánssal lehet keverni. Az adjuváns lehet pl. aluminium hidroxid, vagy egy ásványolajat [pl. Marcol(R)82] vagy növényi olajat és egy vagy több emulzió-képzőt, pl. Tween(R)80-at vagy Span<R)80-at tartalmazó kompozíció. Az élő vakcinák beadhatók szemcseppekben, orrcseppekben, ivóvízben, vagy spray formájában, a beadás 1 napos kortól egészen a tojásrakás időpontjáig (kb. 18 hét) változhat. Az inaktivált vakcina általában 10-20 hetes korban adható be szubkután vagy intramuszkuláris injekció formájában. Az élő vakcinákból az adagolás madaranként log 3-log 7 EIDS0 tartományban történhet, előnyösen log4 és log 5 EID50 között. Az inaktivált vakcinák log 5-log 8 EID50 antigén ekvivalenst tartalmaznak egy madár-dózishoz, előnyösen log 6-log 8 EID50-et. Ha a vakcina (élő, vagy inaktivált) több, mint egyféle korona-vírust tartalmaz, minden egyes törzs a fentebb említett adagolási tartománynak megfelelő szinten legyen jelen. Egy vagy több új madár-eredetű vjrus kombinációja egy vagy több nem rokon madár-eredetű vírussal (mint pl. NDV, fertőző nyáktömlő-betegség vírus, EDS 76 vírus, adeno- és reovírusok) inaktívált vakcinákban szintén a találmány tárgyát képezi. A találmányt a következő példák mutatják be: I. Példa 40 A fertőző bronchitis vírusok izolálása Az izolálás tojó- és tenyészcsirkékből történik a következő eljárással: Légutat áttörölt tampont és/ vagy a bélrendszer vakbél-részéből származó kaparékot antibiotikumot tartalmazó triptóz-foszfát 45 tápközegben szuszpendálunk. Legalább tíz darab 9-11 napos, embriót tartalmazó SPF csirke-tojást inokulálunk vírus-mintával, egyenként beoltva az allantoiszon keresztül. 48-72 órával később a 10 darab passzálásra használt tojás közül négyből az 50 allantoisz-folyadékot és a CAM-et kinyerjük. Kontrollként legalább három vak passzálást hajtunk végre minden egyes passzálási sorozathoz. Az egyes passzálások után megmaradó tojásokat (általában hatot a tízből) hét napig inkubáljuk és a még 55 élő embriókat megvizsgáljuk fejlődési visszamaradásra és FB-re jellemző károsodásokra. JI. Példa 60 Elő vakcinák A. A vírus szaporítása 10-11 napig inkubált, embriót tartalmazó SPF csirke-tojást inokulálunk az 50%-os tojást fertőző 66 dózis (EID50) log 3-log 4 mennyiségével az allan-4
