189127. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az arginin-vazopresszin antidiuretikus és/vagy vazopresszor hatását antagonizáló új oktapeptidszármazékok előállítására

1

189 127

2

Sephadex G-15 oszlopon, gélszűréssel tisztítjuk. A terméket 0,2 mólos vizes ecetsav-oldattal, 4 ml/ óra sebességgel eluáljuk. A peptid egyetlen csúcs formájában jön le az oszlopról (a 280 nm hullámhossznál végzett abszorpció-mérés alapján). A megfelelő frakciókat fagyasztva szárítva 24 mg (hozam: 20,6%) megfelelő cím szerinti vazopreszszin-analógot kapunk.

R,(E) = 0,31, R((F) = 0,62;

[a] = - 65, P (c = 0,2, 1 mólos ecetsav-oldat).

Aminosav-analízis: Tyr: 1,00; Phe: 1,01; Val: 1,01; Asp: 1,01; Pro: 1,01; Arg; 1,00; Gly: 1,00; NH3: 1,97.

A pepiidet perhangyasavval oxidálva, majd ezután hídrolizálva a Cys (03H)-Gly-arány:

1.01 : 1,00.

f I - ( $Merkapto-$,$-ciklopentamet ilén-propionsav), 2-(0-metil)-tirozin, 4-valin, 8-D-arginin-vazopresszin

168 mg (0,115 mmól) peptid-köztiterméket a fent leírt módon cseppfolyós ammóniában nátriummal redukálunk, újraoxidálunk, ionmentesítünk, majd tisztítunk, ily módon 49,5 mg (hozam: 35,5%) cím szerinti terméket kapunk.

R,(E) = 0,30, R((F) = 0,61;

[a]o = -46,4° (c = 0,4, 1 mólos ecetsav-oldat).

Aminosav-analízis: Tyr: 0,98; Phe: 1,01; Val: 0,98; Asp: 0,99; Pro: 1,03; Arg: 0,98; Gly: 1,00; NH3: 12,1.

A pepiidet perhangyasavval oxidálva, majd ezután hídrolizálva a Cys (03H)-Gly-arány: 1,03: 1,00.

[ l-( $-Merkapto-$,\!>-ciklopentametiIén-propionsav), 2-(O-etil)-tirozin, 4-valin, 8-D-arginin ]-vazopresszin

167 mg (0,113 mmól) megfelelő analóg-köztitermékből kiindulva 29 mg (hozam: 20,9%) cím szerinti terméket kapunk.

R|(E) = 0,29, R((F) = 0,57;

[uJd = -41,T (c = 0,3, 1 mólos ecetsav-oldat).

Aminosav-analízis: Tyr: 0,98; Phe: 1,01; Val: 1,03; Asp: 0,99; Pro: 1,03; Arg: 1,02; Gly: 1,00; NH3: 1,98.

A pepiidet perhangyasavval oxidálva, majd ezután hídrolizálva a Cys (03H)-Gly-arány:

1,01 : 1,00.

/ I-($-merkapto-$,$-ciklopentametilén-propionsav), 2-(0-metil)-tirozin,

4-valin ]-arginin-vazopresszin

174 mg (0,119 mmól) acil-oktapeptidet a fent leírt módon kezelve 51,5 mg (hozam: 35,6%) cím szerinti terméket kapunk.

R,(E) —0,28, R,(F) = 0,60;

[a]” = -66,3° (c = 0,4, 1 mólos ecetsav-oldat).

Aminosav-analízis: Tyr: 0,99; Phe: 1,01; Val: 1,02; Asp: 1,01; Pro: 1,00; Arg: 1,01; Gly: 1,00; NH3: 2,11.

A pepiidet perhangyasavval oxidálva, majd ezután hídrolizálva a Cys (03H)-Gly-arány:

1,03 : 1,00.

6. példa

[ l-(fi-Merkapto~fi,$~cikIopentametilén-propionsav), 2-(0-etil)-tirozin, 4-valin,

7-( 3,4-dehidroprolin) ]-arginin-vazopresszin

A cír, szerinti vegyületet az 5. példában leírt módon állítjuk elő, azzal az eltéréssel, hogy prolin helyett 3,4-dehidro-prolint használunk.

7. példa

[ l-($-Merkapto-$,$~ciklopentametilén-propionsav), 2-helyettesitett, 4-valin, 7-prolin]-(L- és D-) -arginin-vazopresszin

E vegyületeket az 5. példában leírt módon állítjuk elő. A termékek tisztaságát szilikagél-lemezeken, két különböző futtató elegyben végzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálattal ellenőriztük; E futtató elegyek:

E. : butanol-ecetsav-víz 4:1:5 arányú elegye,

F. : butanol-ecetsav-víz-piridin 15 : 3 : 3 : 10 arányú elegye.

Az egyes vegyületek Rf-értékei:

X

Z

Rn

Rit

D-Tyr

L-Arg

0,17

0,50

D-Phe

L-Arg

0,17

0,52

Gly

L-Arg

0,15

0,48

D-Ala

L-Arg

0,16

0,49

D-Val

L-Arg

0,17

0,49

D-Leu

L-Arg

0,17

0,53

D-Ile

L-Arg

0,17

0,51

D-Arg

L-Arg

0,08

0,30

D-Phe

D-Arg

0,16

0,51

8. példa

A vazopresszor hatás antagonizálását Dyckes és munkatársai módszerével [J. Med. Chem., 17 (1974), 969] módszerével határoztuk meg. Az eredményeket a Schild és munkatársai által megadott [Br J. Pharmacol., 2 (1947), 189] pA2-értékekben fejezzük ki.

Az antidiuretikus agonista hatást Sawyer és munkatársai [Endocrinology, 63 (1958), 694] módszerével, etanollal altatott, vízterheléses patkányokon, intravénás adagolásban határoztuk meg.

Meghatároztuk a vizsgált vegyületek antagonista hatását is, és ezt „hatásos dózis”-ban, illetve „pA2”-értékekben fejeztük ki. A „hatásos dózis” az a nanomól/kg egységekben kifejezett dózis, amely az antagonista beadás után 20 perccel beadott két egységnyi mennyiségű agonista hatását egy egységnyi agonista hatásával egyenlővé teszi. A becsült in vívó „pA2”-értékek a hatásos dózis és az eloszlás becsült térfogata (67 ml/kg) hányadosának negatív logaritmusai. Az eredményeket az 1. táblázatban adjuk meg.

t

5

10

15

20

25

50

35

to

45

50

55

60

65

11