189110. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)N-helyettesített bleomicin származékok előállítására
1 189 110 2 2. táblázat Vegyület száma Rövidítése Rézmentes forma UV-abszorpciós maximuma, mp (E 1%/1 cm) Réztartalmú forma vékonyréteg kromatográfiás Rf-je*1 Réztartalmú forma elektroforetikus Rm-Je*2 (alanin Rm-ja 1,0) 1. dMCLBZ-PEP 289 (90) 0,53 1,16 2. ' dMCLBZ-OCT 290 (88) 0,50 1,08 3. dMCLPE-PEP 290 (79) 0,53 1,04 4. dMCLPE-OCT 290 (85) 0,52 0,96 5. dMCNBZ-PEP 291 (93) 0,69 1,10 6. dMCNBZ-OCT 292 (94) 0,59 0,95 7. dMCO-PEP 291 (89) 0,53 1,06 8. dMCO-OCT 291 (83) 0,42 0,96 9. dDD-PEP 285 (74) 0,09 0,93 10. dDD-OCT 285 (76) 0,04 0,64 11. dMCLPE-MCLPE 290 (79) 0,25 1,20 12. dMCLPE-BPA 290 (83) 0,60 U1 13. dMCNBZ-BPA 290 (81) 0,70 1,10 Silica Gel 60F SilanizedR (Merck Co.); metanol és 6%-os ammónium-acetát-oldat 60 : 40 térfogatarányú elegye. *2: Avicel SFR (FMC Co.); 27 : 75 : 900 térfogatarányú hangyasav-ecetsav-víz elegy, 800 V, 15 perc. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek biológiai tulajdonságait az alábbiak szerint határozzuk meg. 1. Mycobacterium smegmatis ATCC607 és Bacillus subtilis elleni antibakteriális hatás A baktériumellenes hatást a fent említett baktéri- 35 umokkal határozzuk meg, agarlemezen. Az aktivitás definíciója azon a feltételezésen alapul, hogy a standard bleomicin A2 (rézmentes forma) aktivitása 1000 pg/mg. 2. HeLa S3 sejttenyészet elleni növekedésgátló hatás Műanyag Petri-csészében lévő 10% borjúszéru- 45 mot tartalmazó minimál alaptáptalajt beoltunk HeLa S3 sejtekkel. Két nap múlva a csészébe bleomicint mérünk. Három napos inkubálás után sejtszámolást végzünk. A százalékos növekedésgátlást az alábbi egyenlettel számoljuk ki: B — a %-os gátlás = ahol A a vizsgált anyag hozzáadása után 3 nappal mért sejtszám; B a kontroliban (vizsgált anyag nélkül) mért sejtszám; C a vizsgált anyag hozzáadásának időpontjában mért sejtszám. Az ID50 értéket (50%-os gátló koncentráció) grafikusan határozzuk meg oly módon, hogy a vizsgált minta koncentrációjának függvényében ábrázoljuk a %-os gátlást. A kapott eredményeket a 3. táblázatban közöljük. 3. táblázat Vegyület száma Rövidítése Rézmentes forma baktériumellenes hatása (pg/mg) Rézmentes forma HeLa S3 elleni 50%-os Mycobacterium smegmatis ATCC 607 ellen Bacillus subtilis ellen növekedésgátló koncentrációja (pg/ml) 1. dMCLBZ-PEP 14 880 2590 0,53 2. dMCLPE-OCT 38 200 1808 0,43 3. dMCLPE-PEP 15 593 4267 0,37 4. dMCLPE-OCT 38 750 1898 0,23 5. dMCNBZ-PEP 2L877 11 056 0,60 6. dMCNBZ-OCT 49 270 381 0,28 7. dMCO-PEP 54 345 7273 0,33 8. dMCO-OCT 65 733 5473 0,23 9. dDD-PEP 115 23 0,058 6
