189110. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)N-helyettesített bleomicin származékok előállítására
1 189 110 2 A találmány tárgya eljárás új (amino)-N-helyettesített-bleomicin-származékok és hatóanyagként a fenti származékokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására. Közelebbről, a találmány az (I) általános képletű, alacsony toxicitású új (amido)-N-helyettesített-bleomicin-származékok előállítására vonatkozik. Az (I) általános képletben BM jelentése (a) képletű csoport, X jelentése adott esetben 1-4 szénatomos alkilamino-csoporttal, di(l-4 szénatomos)alkil-aminocsoporttal vagy di( 1—4 szénatomos)-alkil-amino(1-4 szénatomos)alkil-amino-csoporttal helyettesített 1-10 szénatomos alkilcsoport, a fenti helyettesítő csoportokban az alkilcsoportok adott esetben fenilcsoporttal vagy halogén-fenil-csoporttal lehetnek szubsztituálva, R, jelentése 6-10 szénatomos cikloalkilcsoport, fenil-(l-4 szénatomos)alkil-csoport, vagy egy vagy két halogénatommal, cianocsoporttal vagy benziloxi-csoporttal szubsztituált fenilcsoport, és R2 jelentése hidrogénatom vagy —CH2—Rt általános képletű csoport, ahol R, a fenti. A bleomicinek a karcinosztatikus hatású antibiotikumok egyik családját alkotják, a fenti vegyületeket a jelen feltalálók egyike, Umezawa és munkatársai [J. of Antibiotics, 19(A), 200 (1966)] fedezték fel. A fenti antibiotikumokat egy sugárgomba, a Streptomyces verticillus termeli, sajátságaikat tekintve bázikus, vízben oldódó glikopeptidek, amelyek kétértékű rézionnal hajlamosak kelát-kötés kialakítására. Szokásos tenyészetekben a bleomicin-család 16 tagját lehet előállítani, melyek mindegyikét izolálták is [Umezawa és munkatársai, J. of Antibiotics, 19(A), 210 (1966)]. A fenti bleomicinek közül az Ai-et, A2-t, A5-öt, B2-t és dezmetil-A2-t jelenleg a klinikai gyakorlatban széles körben alkalmazzák rézmentes elegyek formájában (a továb biakban a fenti vegyületeket bleomicin-komplex néven említjük) rákellenes szerként, közelebbről, főleg pikkelyes sejt-karcinóma, bőrrák, fej- és nyakrák, tüdőrák és rosszindulatú limfóma kezelésére alkalmazhatók sikeresen. A 3 922 262 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a 30 451 számú amerikai egyesült államokbeli újravizsgált szabadalmi leírásban is ismertettek különféle bleomicin-származékokat. A fenti bleomicineket általában réztartalmú formában állítják elő, a szokásos fermentálási eljárással. A rézmentes formát a réztartalmú forma rézmentesítésével nyerik. A leírásban használt „bleomicin” kifejezés alatt mind a réztartalmú, mind a rézmentes forma értendő, hacsak specifikusan nem jelezzük, hogy milyen bleomicinről van szó. A fenti bleomicinek a (II) képlettel jellemezhetők, a képletben R a bleomicin terminális aminosav-maradékát jelenti, és a réztartalmú formában kelát-kötésben lévő rezet a fenti képlet nem jelöli. A fenti bleomicinek azonban kiváló terápiás hatásuk mellett az alkalmazási módtól függően mellékhatásokkal, például tüdő-toxicitással is rendelkeznek, ennek megfelelően használatukat újabban korlátozzák. A fentiek miatt kívánatosnak tűnt a kevésbé súlyos mellékhatásokat okozó bleomicinek fejlesztése. A fenti igény kielégítése érdekében végzett kutatások során fedeztük fel az (I) általános képletű új (amino)-N-helyettesített-bleomicin-származékokat. Azt tapasztaltuk, hogy az (I) általános képletű bleomicin-származékokat jó hozammal úgy állíthatjuk elő, hogy a 3-[N-metil-N-(3-amino-propil)amino]-propil-amino-bleomicin valamely (III) általános képletű (amido)-N-helyettesített származékát - a képletben BM és X jelentése a fenti - egy (IV) általános képletű vegyülettel - a képletben R, jelentése a fenti - kondenzáljuk redukáló körülmények között. Az (I) általános képletben BM szimbólummal jelölt bleomicin-váz-maradék (a) képletű csoportot jelent, és mind a réztartalmú, mind a rézmentes formát magában foglalja. (IV) általános képletű cikloalkil-aldehidként például (6-10 szénatomos) cikloalkil-aldehideket, így ciklohexil-aldehidet, ciklooktil-aldehidet, ciklodekanoil-aldehidet stb. használhatunk. Fenilcsoporttal helyettesített telített alifás aldehidként, amelyben a fenilcsoport is helyettesítve lehet, például fenilcsoporttal helyettesített 1-5 szénatomos telített alifás aldehideket, így fenil-acetaldehidet, fenil-etilaldehidet vagy halogénatommal helyettesített fenilacetaldehideket, így klór-fenil-acetaldehidet használhatunk. Benzaldehidekre példaként a benzaidehidet, halogén-benzaldehideket - így p-klórbenzaldehidet, m-bróm-benzaldehidet -, cianobenzaldehidet és benzil-oxi-benzaldehideket - például m,p-di(benzil-oxi)-benzaldehidet - említhetjük. A találmány szerinti eljárás kiindulási anyagakét használt (III) általános képletű vegyületeket úgy állíthatjuk elő, hogy a 3-[N-metil-N-(3-aminopropil)-amino]-propil-amino-bleomicint - a továbbiakbam APMP-bleomicinnek nevezzük - egy bleomicin-inaktiváló enzim segítségével - melyet a továbbiakban inaktiváló enzimnek nevezünk; [Umezawa és munkatársai J. of Antibiotics, 27,419 (1974)] - hidrolizáljuk, és a kapott (VI) képletű 3-[N-metil-N-(3-amino-propiI)-amino]-propilamino-dezamido-bleomicint - melyet a továbbiakban APMP-dezamido-bleomicinnek nevezünk - egy (V) általános képletű aminnal - a képletben X jelentése azonos az (I) általános képletre megadott jelentéssel - kondenzáljuk. Az X szimbólum például 6-10 szénatomos alkilcsoportot vagy egy primer aminnal szubsztituált 2-6 szénatomos alkilcsoportot jelenthet. X jelentése előnyösen n-oktil-, fenil-etil-amino-propil-, 3- [N-meti!-N-{3-[2-(p-klór-fenil)-etil]-amino-propil}amino]-propil- vagy di(n-butil-amino-propil)csoport lehet. A (III) általános képletű kiindulási anyagokat például az alábbiak szerint állíthatjuk elő. Marhamájat foszfát-pufferoldattal homogenizálunk. A homogenizátumot 8000 fordulat/perc-cel centrifugáljuk. A felülúszót foszfát-pufferral szemben dializálva nyers enzimoldatot kapunk. A nyers enzimoldathoz rézmentes formában lévő APMP- bleomicint adunk, foszfát-pufferben oldva. Az elegyet 37 °C-on 5-48 órán át inkubáljuk. A reakcióelegyet ezután valamely alkalmas módszerrel fehérjementesítjük, például oly módon, hogy 5%-os tri-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
