188955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzimet termelő fermentlé előállítására
1 188 955 50 g a vizsgálandó 45 s% szárazanyag-tartalmú hőkezeletlen (hidrolizálatlan) kukoricalekvárt, vagy 100 ml kukoricamoslékot, 30 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 1 g magnézium-kloridot, 0,05 g kobalt-kloridot, 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt és 0,20 g nátrium-biszulfitot. A tápközeghez összekeverés után a B12 koenzim fermentorból 300 ml fermentlevet adunk és 30-32 °C-os csapvízzel 10 1-re egészítjük ki, a fermentor nyílását gumilappal lefedjük és 32— 34 °C-os termosztátba helyezzük. Naponta felkeverés után 50 ml metanolt adunk hozzá, egyúttal a biogáz termelés sebességének meghatározására 200 ml fermentlevet veszünk ki, a fermentort lefedjük és 32—34 °C-on tovább fermentálunk. Ha a fermentálás 4. napján a biogáztermelés legalább 0,3—0,6 1/1 fermentlé/nap, akkor az ismertetett hőkezelés elvégzése után a kukoricalekvár alkalmas az inokulum előállítására. Az 5,6-dimetil-benzimidazolt metanolban oldva adjuk a táptalajhoz. A többi tápanyagot közvetlenül a tápközeghez adjuk és oldjuk fel. b) Félfolyamatos fenntartó fermentálás ' Az 50 1 hasznos térfogatú fermentorban előállított inokulumból a félfolyamatos fenntartó fermentálás kialakítása során naponta a fermentlé mintegy 10%-át elvesszük és feldolgozzuk, helyébe azonos térfogatú, fenntartó tápközeget adunk, amelyet a következő módon készítünk: 5,0 1 30—35 °C-os vízbe az alábbi tápanyagokat adagoljuk: 300 ml metanolt, 50 ml hőkezelt kukoricalekvár oldatot (hidrolizátumot), vagy 100 ml hőkezelt kukoricamoslékot, 17,5 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,5 g magnézium-kloridot, 0,05 g kobalt-kloridot, 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt (az 5,6-dimetil-benzimidazolt előzőleg 10 ml metanolban feloldjuk) és 0,15 g nátrium-biszulfitot. A tápközeget homogenizálás után a fermentlevet tartalmazó 50 1 hasznos térfogatú fermentorba öntjük, alapos keverés után a fermentort lezárjuk és anaerob körülmények között 32—34 °C hőmérsékleten fermentálunk. A naponta elvett 5 1 fermentléből mintát veszünk és az a) pontban ismertetett módon meghatározzuk a hatóanyag (BH koenzim és III. faktor) és a metanol tartalmát, valamint a pH-értékét. A félfolyamatosítás 6—8. napján, ha a metanolizis sebessége eléri a 0,2 g metanol/1 fermentlé/óra értéket, a fent megadott tápközeghez 5 g ammőniüm-szulfátót és 0,2 g o-xilidint is adagolunk. Az o-xilidint 15 ml metanolban oldjuk fel. A továbbiakban a 10% fermentlé elvételt és a fentiekben megadott (ammónium-szulfátot és o-xilidint is tartalmazó) fenntartó tápközeg beadagolást naponta megismételjük. Ily módon az inokulum fermentáció fokozatosan fenntartó fermentációvá, alakult át, amelynek hatóanyag-tartalma 17,5 mg/1. c) Szakaszos termelő fermentálás A félfolyamatos fenntartó fermentálás során naponta elvett 5 1 fermentlevet a hatóanyagtartalom növelése céljából szakaszosan az alábbi módon utófermentáljuk: A fermentlevet 5 1 hasznos térfogatú üvegfermentorba töltjük, majd az alábbi tápanyagokat adjuk hozzá: 45 ml metanolt, 3.5 g kukoricalekvárt (szárazanyag-tartalom 45%), vagy 15 ml hőkezelt kukoricamoslékot, 2.5 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 1.5 g ammónium-szulfátot, 0,005 g kobalt-kloridot, 0,01 g 5,6-dimetil-benzimidazolt* és 0,01 g o-xilidint* *az 5,6-dimetil-benzimidazolt és az o-xilidint 5 ml metanolban oldva adjuk a fermentléhez, ily módon a beadagolt metanol össztérfogata 50 mí. A tápanyagok beadagolása után a fermentort gumilappal lefedjük és egy napig 32-34 °C hőmérsékleten állni hagyjuk, a következő napon (2. nap) újabb tápanyagokat adunk hozzá: 20 ml metanolt, 1.5 g kukoricalekvárt (szárazanyagtartalom 45%), vagy 6 ml hőkezelt kukoricamoslékot és 1,5 g ammónium-hidrogén-karbonátot. A tápanyagok beadagolása után a fermentlevet ismét gondosan összekeverjük, a fermentort gumilappal lefedjük és még egy napig 32—34 °C hőmérsékleten állni hagyjuk. Az első vagy második nap után a fermentlé hatóanyag-tartalma: 26 mg/1. 2. példa Az 1. példa b) pontjában leírt módon félfolyamatos fenntartó fermentálást végzünk, a fermentlé hatóanyag-tartalma 17,5 mg/1. A napi ciklusos fermentlé elvétel és betáplálás rendjét négy napos időtartamra megszakítjuk oly módon, hogy a fermentáció egy adott napján csak 1 1 fermentlevet veszünk el és a következő négy napon - az elvétel további szüneteltetése mellett — ennek helyébe naponta 450 ml metanolt és 250 ml 30—35 °C-os ivóvízben oldott alábbi táp-, anyagokat adjuk be: 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
