188955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzimet termelő fermentlé előállítására
1 188 955 2 50g hidrolizált kukoricalekvár oldatát, 30 g ammónium-hidrogén-karbonátot, JJ3 g ammónium-szulfátot, 0,5 g magnézium-kloridot, 0,15 g kobalt-kloridot, 0,10 g 5,6-dimetil-benzimidazolt, 0,10 g o-xilidint és 0,10 g nátrium-biszulfitot. Az ötödik naptól a félfolyamatos üzemelést a szokásos módon folytatjuk, naponta 5 1 fermen tlevet veszünk el és helyébe naponta 500 ml metanolt és 5 1 30-35 °C-os vízbe az alábbi tápanyagokat adjuk be: 50 g hidrolizált kukoricalekvár oldatát, 17,5 g ammónium-hidrogén-karbonátot, 5 g ammónium-szulfátot, 0,5 g magnézium-kloridot, 0,05 g kobalt-kloridot, 0,03 g 5,6-dimetil-benzimidazolt, 0,2 g o-xilidint és 0,15 g nátrium-biszulfitot.__ A továbbiakban a fermentlé elvételt és tápközeg betáplálást a fenti módon naponta megismételjük. Az így kapott fenntartó fermentlé hatóanyagtartalma 24,6 mgH A fenntartó fermentorból ezt követően naponta elvett 5 1 fermentlevet a hatóanyag tobábbi növelése céljából szakaszosan utófermentáljuk az 1. példa c) pontjában leírt módon. (Szakaszos termelő fermentálás.) A 48 órás utófermentálás fermentlevében a hatóanyag-koncentráció 32 mg/1. 3. példa Ebben a példában azt bizonyítjuk, hogy a hőkezelt (hidrolizált) kukoricalekvár oldata hatásosabb, mint a hőkezelés nélküli nyers kukoricalekvár. Mindenben az 1. példa b) pontja szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy az 5 1 tápoldathoz az 50 ml hőkezelt kukoricalekvár oldata helyett (amelyet 25 g, 45% szárazanyagot tartalmazó kukoricalekvárból készítettünk) 50 g 45% szárazanyagot tartalmazó hőkezelés nélküli kukoricalekvárt adunk. Ily módon a fenntartó fermentlé 17,0 mg/1, a 48 órás utóTermentált fermentlé (lásd 1. példa c) pontját) 25,0 mgA hatóanyagot tartalmaz, azaz mind félfolyamatos fenntartó, mind a szakaszos termelő fermentlé hatóanyag tartalma az 1. példa b) és c) pontjában ismertetett fermentlevek hatóanyagtartalmával gyakorlatilag megegyezik annak ellenére, hogy a hőkezeletlen kukoricalekvárból kétszeres mennyiséget alkalmaztunk. _ 4. példa Mindenben az 1. példa b) pontja szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy az 50 1-es félfolyamatos üzemelő fermentor napi tápközegébe az 50 ml.hőkezelt kukoricalekvár oldat helyett táp-8' anyagként 75 g 30% szárazanyag-tartalmú kukoricamoslékból készült 150 ml hidrolizált oldatot adunk. A kukoricamoslék hőkezelését (hidrolízis) a kukoricalekvár hőkezelésével azonos módon 5 ( 1. példa) végezzük. Az 1. példa c) pontja szerinti utófermentálásnál az első napon beadagolt 3,5 g 45%, illetve a második napon betáplált 1,5 g 45% szárazanyagtartalmú kukoricalekvárt 5,25 g, illetve 2,25 g hőkezelt kukoricamoslékkal helyettesítjük. A kétnapos utófermentált fermentlé hatóanyagtartat-, ma 25,2 mg/1. A példa azt bizonyítja, hogy a kukoricalekvárt, illetve a hidrolizált oldatát hőkezelt kukoricamos- 5 lékkai is helyettesíthetjük. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás új, anaerobmezofil, metántermelő vegyes mikropopulációval végzett Bj2 koenzimet tartalmazó fermentlé előállítására, anaerob, szeptikus körülmények között, metanolt, prekurzor(oka)t és részben ismert tápanyag-komponenseket tartalmazó új táptalaj alkalmazása útján, azzal jellemezve, hogy i. ) 6-8 napon át az anaerob, mezofil, metántermelő, új vagy mikropopulációt tartalmazó 2Q inokulum fermentlé 5-15 tf%-át elvesszük és helyébe azonos térfogatú 5,0-7,0 tf% metanolt, 0,5—2,0 tf% hőkezelt kukoricalekyár oldatot, vagy 0,7—3,5 tf% hőkezelt kukoricamoslékot, 0,25—0,6 v% ammónium-hidrogén-karbonátot, 0,005-0,05 v% magnézium-kloridot, 0,0005—0,005 v% kobalt-kloridot, 0,0003—0,003 v% 5,6-dimetil-benzimidazolt (metanolban oldva), és 0,002—0,008 v% nátrium-biszulfitot tartalmazó tápközeget adunk és kívánt esetben az elvett fermentlevet feldolgozzuk, ii. ) a legalább 0,15-0,2 g metanol/1 ferment- 45 lé/óra asszimilációs sebesség elérése után a fer! mentié elvételt azonos módon folytatjuk, és helyébe azonos térfogatú 0,05-0,2 v% ammónium-szulfáttal és 0,002—0,006 v% o-xilidinnel kiegészített 50i egyéb tápanyagok mennyiségében és minőségében azonos tápközeget adunk és a fermentálást 7— 10 napig folytatjuk, kívánt esetben az elvett fermentlevet feldolgozzuk, iii. ) 0,2—0,3 g metanol/1 fermentlé/óra asszi- 55'milációs sebesség elérését, azaz az inokulum fermentlé fenntartó fermentlévé történő átalakulását követően a fermentlé elvételét és a tápközeg beadagolását az if.) lépés szerint folytatjuk, kívánt esetben a fermentlé elvételt 4-6 napig szünetel-00 tétjük, majd
