188684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponenesének valanint a vele egyszerre keletkező A1 és A2 komponensek előállítására
1 188 684 2 A találmány tárgya eljárás az A/16686 jelű antibiotikum komplex, annak A2 komponensének, egy klór-tartalmú antibiotikumnak lényegében tiszta formában történő előállítására, valamint a. vele egyszerre keletkező Ai és A3 antibiotikum komponensek előállítására. Ezt az antibiotikumot egy mindeddig ismeretlen törzs tenyésztése során állítjuk elő, mely taxonómiailag az Aetinoplanes nemzetséghez tartozó, új fajként jellemezhető. Ennek a törzsnek a tenyészetét, melyet Vaghalbod (India) környékén gyűjtött talajmintából izoláltunk, 1979. január 30-án letétbe helyeztük az amerikai Nemzeti Törzsgyííjteménybe (12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA), ahol az ATCC 33076 sorszámot kapta. Az A/16686 antibiotikum A2 komponense mellett, mely a tenyészet által előállított fő komponens, két más, külön további kis mennyiségben jelenlevő antibiotikum komponenst izoláltunk az új Aetinoplanes tenyészet által előállított fermcntlébüL Ezeket a különböző antibiotikumokat A/16686 antibiotikum A, és A3 komponensének jelöljük. Az A/16686 antibiotikum A2 komponensét az ATCC 33076 számú Aetinoplanes törzs süllyesztett, levegőztetett tenyésztése során állítjuk elő, mindaddig, míg megfelelő anlihiotikus aktivitása nem lesz a fennentlének. Az A/16686 antibiotikum. -A2 komponensét az, Aj és Aj komponensekkel együtt, antibiotikum komplexként izoláljuk a fennentlé és a micélituu poláros, szerves oldószerekkel történő exírakciója során, majd az A2 komponenst az A/16686 komplexből például kromatográfiás technikákkal, például IIP! ,C, oszlop■kromatográfia és prepa ratív vékony ró teg-kroina tográ fia módszerrel tiszta formában izoláljuk. Ugyanez a technika használható az egyszerre keletkező Ai és A:, komponensek izolálására. Az. A/16686 jelű amihiotikum A2 komponense, vak» mint az, egyszerre keletkező,Aj és A3 komponensek báz.isos jellegűek, és így savaddieiós sók képzésére képesek. Az. A/l()68(> antibiotikum A-, komponense, valamint az A| és A3 komponensek fiziológiailag elfogadható savaddidós sói a találmány részét képezik. „Fiziológiailag elfogadható” savaddieiós sók azok, amelyek larmakológiailag elfogadhatók; azaz olyan sók, melyekben a hatóanyag loxicitásn nem növekszik a bázis-formához viszonyítva. Az. elérhető és jellemző savadüiciös sókhoz, tartoznak a szerves vagy szervetlen savakkal képzett sók; olyan savakkal, mintapéldául a sósav, hidrogén-bromid, kénsav, fos/forsav, salétromsav, borkősav, ecetsav, boroslyánkősav, tejsav, glutamin.sav, mctán-szulfonsav és hasonló sók. Az A/lóoKó aníiimüü.um A,, A2 és A3 szabad bázisait a megfelelő savaddieiós sókból lehet előállítani, vagy fordítva; az A/16686 antibiotikum A,,A2 és A3 komponensek savaddieiós sóit a megfelelő szabad bázisokból állíthatjuk elő a ' ezen a területen általánosan használt eljárások s/enní. Az A/16686 antibiotikum Alt A2 és A, komponenseinek Szabad bázisait a megfelelő savaddieiós sókból kapjuk; például, lia a savaddieiós só oldatát bárium-hidroxiddal kezeljük, míg a szabad bázisoknak a kiválasztott- szerves vagy szervetlen savakkal az inert oldószer-oldatban való reakciója adja a megfelelő savadd idős sókat. A leírásban az egyszerűség kedvéért az A/16686 hatóanyag kifejezést használjuk ezentúl, amikor az. A/lóó86 antibiotikum A1 ,A, és A3 komponensei közül valamelyiket tárgyaljuk, valamint a megfelelő, nemtoxikus, fiziológiailag elfogadható savaddieiós sókat. Az, A/16686 hatóanyagok in vitro gátolják bizonyos putogén baktériumok növekedését, különösen a Gram-pozitívaként; sőt az A/16686 hatóanyagok szájon át történő adagolása egereknél magas fokban védelmet nyújt kísérletes fertőzések ellen. Az A/16686 hatóanyagok hasznosak a fogszuvasodás megelőzésében és kezeléseben. Mint a fentiekben ismertettük, az A/16686 antibiotikumok az /Aetinoplanes nemzetséghez tartozó új törzs, melyet ATCC 33076 számú Aetinoplanes spccies-nek nevezünk, tenyésztésével állítunk elő. Ennek a törzsnek a jellemzőit a következőkben adjuk meg. 3 forfológia A törzs jól nő különböző táptalajokon, és a s/.ubsztrát-micélium színe narancs. Nem termel színanyagot. A lcgmicélium.mindig hiányzik. A mikroszkópos vizsgálatok szerint a vegetatív mic éli unt elágazó, és a fonalak vastagsága körülbelül 1 gin. A spóratartók gyengén képződnek burgonyás agaron, és a felszínük nagyon szabálytalan; átmérőjük 5—9 pun között változik. A spóratartóból való kiszabadulást a spóratartó falának széttörése után figyelhetjük meg. A gömbölyű spórák mozgékonyak (1.0—1,5 gin álméröjüek). A'sejtfal komponensek analízise során mezőt diamino-pimelinsavat, valamint D-típusú cukor-speklrunot talállak (Leehevalicr cs munkatársai, Chemical composition as a critérium in the classification of Action mycetes: Adv. Applied Microbiology, 14, 1971., Academic Press, N. Y.). Tenyésztési jellemzők Az 1. táblázat bemutatja az. ATCC 33076 számú Aetinoplanes tenyésztési jellemzőit a Shilling és Gottlieb által javasolt különböző standard táptalajokon (Intern. J. System. Back 16, 313 -3-10., 1966.), valamint más Waksman által javasolt táptalajokon (The Actinomycètes, Vol. TI. — The Williams and Wilkins Co., , 9ó 1.). A tenyésztési jellemzőket 6- 14 napi, 30 °C-on végzett inkubálás után határozzuk meg. I. Táblázat Tenyésztési jellemzők Néhány tenyésztő táptalaj száma megfelel a Shilling és Gottlieb által megadottaknak a Methods for characterization of Streptomyees species (intern. .1. System. Hack 16, 313 310, 1966.). Tenyésztő táptalaj Tenyésztési jellemzők 1. számú táptalaj bőséges növekedés, ráncos fclii(clcs/.lőkivonat-maláta let, világosbarna, 12 11 12 agai) 1. számú táptalaj gyenge növekedés, vékony, (zabliszt agar) világosnarancs, 9 B 6 I. számú táptalaj közepes növekedés, kérges (szervetlen sók- ke- felület, narancs szín, 11 L 12 menyi tö-agar) 5. számú táptalaj gyenge növekedés, átlátszó (glicerin-as/paragin;ig;ir) 6. számú táptalaj gyenge növekedés, állálsz.ó(pepton-éles/.lökivo- világosbarna nat-vas-ag:u ) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 ~>
