188618. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív enkefalin-analógok előállítására
1 188 613 2 acetátban, és az oldatot először 1 normál nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, utána vízzel, ezután lehűtött 1,5 normál citromsav-oldattal, és végül megint vízzel mossuk. A szerves részt vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon szilárd anyag formájában 13,4 g (hozam: az elméletinek 104 %-a) cím szerinti vegyüietet kapunk. NMR-spektrum: delta (Boc), 1,3; delta {-N(CH3)2), 2,9. Tömegspektrum: molekulaion: 320. b) lépés l-Etil-amino-l-benzil-2-dimetil-amino-etán Egy gömblombikba bemérünk 30 ml vízmentes piridint, és hozzáadunk 1,1 g (30 millimól) nátrium-bórhidridet, majd 3,2 g (10 millimól), a fenti a) lépésben leírt módon kapott terméket. Az elegyet 40 órán át forralva keverjük, majd szobahőmérsékletre hűtjük és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Az olajos maradékhoz lassan, 1 óra alatt 1,5 normál vizes citromsav-oldatot adunk, majd az így kapott oldat pH-ját 1 normál sósavval 5,0-ra állítjuk. Ezután a vizes elegyet etil-acetáttal egyszer kirázzuk, majd a vizes rész pH-ját 2 normál nátrium-hidroxid-oldattal 9,5-re állítjuk. Ezután a vizes elegyet etil-acetáttal kirázzuk, az etil-acetátos részt vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon olaj formájában 1,2 g (hozam: 58%) cím szerinti vegyüietet kapunk. NMR-spektrum: delta (fenil). 7,2; delta [-N(CH3)2 ], 2,2. [a]p = + 28,78° (c = 0,5,metanol). ej lépés Nalfa-tercier-Butoxi-karbonil-D-alanil-glicin[N-etil-N-(l-benzil-2-dimetil-amino)-etil]-amid 15 ml dimetil-formamidhoz hozzáadunk 824 mg (4 millimól), a fenti b) lépésben leírt módon kapott terméket. Az elegyet 0 °C hőmérsékletre hütjük és hozzáadunk 1,06 g (4 millimól) Nalfa-tercier-butoxi-karbonil- D-alanil-glicint, 540 mg (4 millimól) 1-hidroxi-benzotriazolt és 824 mg (4 millimól) N.N’-diciklohexil-karbodiimidet. A rcakcióelcgyet 4 órán át 0 °C hőmérsékleten, majd 72 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána 0 °C hőmérsékletre hűtjük, a szilárd részeket kiszűrjük, és a szűrletről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk etil-acetát és víz kétfázisú elegyében, az elegy pH-ját 2 normál nátriumhidroxid-oldattal 9,5-re állítjuk, az etil-acetátos részt elválasztjuk, vízzel egyszer mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékként kapott olajat felvisszük egy Water’s-féle szilikagél oszlopra, és az oszlopot egy System 500A jelzésű Water’s-féle preparatív folyadék-kroniatográfban szakaszos gradiens elucióval (oldószer: acetonitril-»- tetrahidro-furánjeluáljuk. Az elutumot vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel vizsgáljuk, a megfelelő frakciókat egyesítjük, és a terméket elkülönítjük. Ily módon 1,7 g (hozam: 100 %) cím szerinti vegyüietet kapunk. [c*]q5 = + 7,60° (c = 0,3, metanol). \nalízis a C23H38N404 képlet alapján (mólsúly: 434,6): számított: C 63,57; II 8,81; N 12,89; talált: C 63,87; H 8,71; N 12,49. d) lépés Naira-tercier-Butoxi-karbonil-L-(N-metil)-tirozil-D-alanil-glicin-[N-etil-N(l-benzil-2-dimetil-amíno)-etil]amid 20 ml trifluor-ecetsav és 3 ml anizol elegyéhez hozzáadunk 1,7 g (3,9 millimól), a fenti c) lépésben leírt mólon kapott terméket. Az elegyet félórán át 0 °C hőmérsékleten keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson, melegítés nélkül ledesztilláljuk. A maradékként kapott olajat dietil-éterrel többször eldörzsöljük, az oldószert minden alkalommal leöntjük. Ezután a maradék olajat feloldjuk etil-acetát és víz kétfázisú elegyében, és az elegy pH-ját 2 normál nátrium-hidroxid-oldattal 10,0-ra állítjuk. A szerves részt elválasztjuk, vízmentes magnézium-szulfáton megszárítjuk és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Ily módon olajos terméket kapunk. 1,86 g (3,9 millimól) NaIfa-tercier-butoxi-karbonil- Nalfa-metil-L -tirozin-diciklohexil-amin-sót feloldunk 15 ml dimetil-formamidban, az oldatot -15 °C hőmérsékletre hütjük, majd az erélyesen kevert oldathoz hozzáadunk 3 csepp N-metil-morfolint és 0,51 ml (3,9 millimól) klórhangyasav-izobutil-észtert. Az elegyet -15 °C hőmérsékleten keverjük, és eközben az előző bekezdésben leírt módon előállított, helyettesített dipeptid szabad bázis formáját feloldjuk 5 ml dimetil-formamidban, az oldatot 0 °C hőmérsékletre hűtjük, majd keverés közijén hozzáadjuk a vegyes anhidrid oldatához. A reakciódegyet 4 órán át -15 °C hőmérsékleten keverjük, majd a szilárd részeket kiszűrjük és a szűrletről az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk etil-acetát és víz kétfázisú elegyében, az elegy pH-ját'2 normál nátrium-hidroxid-oldattal 9,8-ra állítjuk, az etil-acetátos részt elválasztjuk, vízmentes magnéziumszulfáton megszárítjuk, és az oldószert csökkentett nyonáson ledesztilláljuk. Ily módon olaj formájában 1,8 g (hozam: 76 %) cím szerinti vegyüietet kapunk. NMR-spektrum: delta (Boc), 1,2; delta [-N(CH3)2]. 2,2. ej lépés L-(N-Metil)-tirozil-D-alanil-glicin[N-etil-N-(l-benzil-2-dimetil-oxido-amino)-etil]amid-diacetát 50 ml tetrahidro-furán és 5 ml víz elegyéhez hozzáadunk 2,0 g (3,3 millimól), a fenti d) lépésben leírt mólon kapott terméket. Az oldathoz hozzáadunk 0,37 ml (3,3 millimól) 30%-os hidrogén-peroxidot, és az elegyet 48 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradé-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
