188113. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az 5057-B jelzésű új antibiotikum bázikus sóinak előállítására

A találmány tárgya eljárás 5057B jelzésű új antibiotikum bázikus sóinak előállítására.

Saját korábbj találmányunk kidolgozása során azt találtuk, hogy az Actinomycetales rendbe tartozó Streptomyces sp. 5057 törzs, amely a Streptomy- 5 ces nemzetséghez tartozik (deponálási száma: FERM BP-62) olyan új anyagot termel, amely a tápközegben baktériumölő hatást fejt ki. Az új antibiotikumot a tápközegtől elkülönítettük és 5057A jelzéssel ismertettük a közzétett 8641/1979 10 sz. japán szabadalmi leírásban.

További kutatásaink során azt találtuk, hogy a tápközegben egy másik új anyag is jelen van, mely különbözik az 5057A antibiotikumtól. Ezt is elkülönítettük és 5057B antibiotikumnak nevezzük. 15

Az 5057B antibiotikum - fiziko-kémiai és biológiai tulajdonságait tekintve - a poliéter típusú antibiotikumok csoportjához tartozik. A poliéter típusú antibiotikumok közül a 290 nm környezetében UV sugarakat abszorbeálóként már ismeretes a 20 lysocellin (The Journal of Antibiotics, 28, 1975,

118-121 o.) és az általunk előállított 5057A antibiotikum; az 5057B antibiotikum új anyag, amely különbözik az említett ismert antibiotikumoktól mind az olvadáspont, mind a fajlagos forgatóképesség, 25 az IR spektrum és a szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás Rr tényező tekintetében.

A találmány tárgya tehát eljárás az új, 5057B jelzésű antibiotikum bázikus sóinak előállítására, amely szernek különösen Gram-pozitiv baktériu- 30 mok esetében erős a baktériumölő hatása; az«eljárás során a Streptomyces nemzetséghez tartozó olyan mikroorganizmust tenyésztünk, amely képes az 5057B antibiotikum termelésére, majd a tápközegből kinyerjük az 5057B antibiotikumot. 35

A Streptomyces nemzetséghez tartozó, az 5057B antibiotikum előállításához használt Streptomyces sp. 5057 törzset 1981. május 1-jén a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology (No. 1-3, Yatabechohigasi 40 l-chome, Tsukuba District, Ibaragi Prefecture, Japan) intézetnél helyezték letétbe FERM BP-62 számmal. E törzs mikrobiológiai tulajdonságait is részletesen ismertettük a már említett 8641/1979 sz. japán szabadalmi leírásban. 45

A jelen találmány szerinti 5057B antibiotikum előállítása céljából az Actinomycetales rendbeli mikroorganizmusok tenyésztésére alkalmazott szokásos eljárások valamelyikét alkalmazhatjuk; ipari méretű termelés céljára különösen alkalmas a leve- 50 gőztetés és keverés alkalmazásával végzett tenyésztés. A tenyésztési hőmérséklet általában 25-35 °C közötti, előnyös a 30 °C hőmérséklet alkalmazása.. Tápközegként alkalmazhatók a Streptomyces nemzetséghez tartozó mikroorganizmusok tenyészété- 55 sénél szokásosan alkalmazott közegek, pl. olyanok, amelyek szénforrásként glükózt, keményítőt, glicerint, dextrint, szacharózt, illetve állati vagy növényi olajokat tartalmaznak, s nitrogénforrásként szójabab lisztet, kukoricaáztatólét, búzacsírát, illetve 60 ammóniát. Előnyösen szervetlen sók is adhatók hozzá, pl. kalcium-karbonát, nátrium-klorid, kálium-klorid vagy foszfát(ok). Alkalmasan választott mennyiségben hozzáadhatunk további - szerves vagy szervetlen - sókat is, amelyek serkentik a 65

1 188 1

mikroorganizmus növekedését és ösztönzik az 5057B antibiotikum termelődését. A termelődő 5057B antibiotikum halmozódása általában a tenyésztés kezdetétől számitott 4-8 nap között éri el maximumát, akár rázott edényben, akár fermentorban végezzük a tenyésztést.

A tenyészközegből az 5057B antibiotikumot fiziko-kémiai tulajdonságainak hasznosításával különítjük el. Minthogy az anyag lipidekben oldódó és savas, alkalmas összetételben elegyített különböző szerves oldószerekkel extrahálhatjuk, ugyancsak különböző aktív adszorbensek alkalmazásával kromatografálhatjukj elkülönítésére más módszert is alkalmazhatunk. így pl. az extrahálás és kromatografálás kombinációjával az elkülönítést a következőképpen végezhetjük: A tápközeghez szűrést elősegítő anyagot adunk, amely lehet pl. diatómaföld vagy Radiolite 700, majd szűrjük és mind a szűrletet, mind a mikrobiológiai sejteket extraháljuk alkalmas oldószerrel, pl. etil-acetáttal vagy acetonnal. A sejtextraktumot és a szűrletextraktumot egyesítjük. A kombinált extraktumból az oldószert kidesztilláljuk, a kapott maradék tartalmazza az 5057A és 5057B antibiotikumok elegyét nyers kristályok alakjában. Az elegyből az 5057B antibiotikumot pl kromatografálással különíthetjük el. Az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk, majd a maradékot alkalmas oldószerben, pl. etil-acetátban előbb hígított sósavas oldattal, majd hígított nátrium-karbonátos oldattal kezeljük; a kezelés végén az 5057B antibiotikum nátriumsóját kapjuk kristályos alakban. Alkalmas oldószerből, pl. nhexán és etil-acetát elegyéből átkristályosítva az 5057B antibiotikum tiszta nátriumsóját kapjuk. Az így kapott 5057B nátriumsó tulajdonságai a következők:

(1) Színtelen, tűalakú kristály (maga az 5057B anyag savas).

(2) Olvadáspont: 143-145 °C.

(3) Elemzési eredmény (talált %):

C H O Na

59,96 9,03 27,60 3,41

(4) Fajlagos forgatóképesség:

[aß= +5,5°(c=1,CHC13).

(5) UV spektrum:

A 0,25%-os metanol (MeOH) oldatban felvett abszorpciós spektrumot az 1. ábra mutatja.

Maximális elnyelés: A má°H(E{"cm = 290 nm

(0,88)

(6) Jellemző IR abszorpció (kálium-bromid tabl., cm"1):

3480, 3000, 2970, 2812, 1719, 1645, 1595, 1465. 1385, 1160, 1100, 1035, 980;

Az IR abszorpciós spektrumot a 2. ábra mutatja.

(7) NMR spektrum (CDC13):

A proton NMR spektrumot a 3. ábra mutatja.

(8) Oldhatóság:

Oldható metanolban, etanolban, etil-acetátban. kloroformban, éterben, acetonban, benzolban, stb.; nem oldható vízben.

(9) Szinreakció:

Pozitív a 2,4 dinitro-fenil-hidrazin reakcióban; negatív a ninhidrin reakcióban és a vanilin-kénsavas reakcióban; I2 gőzzel barna szín képződik.

(10) Vékonyrétegkromatográfia:

13 2

2