188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 188 081 2 trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsav-oldatban feloldjuk, és 15 ml anioncserélőn, például AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük, az eluátumot liofilizáljuk. A kapott, cimben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan 3 rendszerben vizsgálva egységes: DC: 52 számú rendszer: Rf=0,49, 111B számú rendszer: Rr = 0,38, 157F számú rendszer: Rf=0,52. CD: 1%-os vizes ecetsavban: 2/mol. Ellipt. [nm/fok - cm2 • dmol ']: 220/+ 30 354(max); 232,5/- 13 81 l(min). A 4.A és 4.B példában kiindulási anyagként alkalmazott peptideket az alábbi módon állítjuk elő. 4.1 lépés dl-H-[/?-(3-Fenoxi-fenil)]Gaba-OBzl-p-toluol-szulfonát 0,500 g dl-4-amino-3-(3-fenoxi-fenil)-vajsavklorid és 0,308 g p-toluolszulfonsav-monohidrát 0,85 ml benzilalkohollal és 70 ml benzollal készített elegyét normál nyomáson lassan addig desztilláljuk, amíg 3 óra alatt 30 ml, 70-90 °C forráspontú frakciót fel nem fogunk. A tiszta reakcióelegyet vízsugárszivattyúval előállított, majd nagy vákuumban körülbelül 60 °C hőmérsékleten 3 ml-re betöményítjük. A kivált kristálypépet 15 ml éterrel elkeverjük, a kristályokat leszűrjük és 10 ml éterrel mossuk. Ezt az anyagot további tisztítás céljából szobahőmérsékleten egy órán át keverjük 10 ml éterrel, majd leszűrjük, éterrel mossuk és vákuumban megszárítjuk. DC: [kloroform-metanol-víz (14 : 6 : 1)]: Rf=0,61, [kloroform-metanol (85: 15)]: Rf=0,30. 4.2 lépés Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-(3-fenoxi-fenil)]Gaba-OBzl 819 mg Z-Asn-Phe-Phe(D-trp)-Lys(Boc)Tjr(But)-Phe-OH (1.2 lépés) és 341 mg dl-4-amino-3-(3-fenoxi-fenil)-vajsav-benzilészter-p-toluolszulfonát (4.1 lépés) 6 ml dimetilformamiddai készített elegyét összekeverjük 0,071 ml N-metil-morfolinnal, 95 mg N-hidroxi-benztriazollal és 171 mg N,N'-diciklohexil-karbodiimiddel, és az elegyet 20 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegy feldolgozása céljából a kivált diciklohexilkarbamidot centrifugálással eltávolítjuk, a felülúszót 20 ml vízzel elkeverjük és a terméket leszűrjük. A kapott szilárd anyagot további tisztítás céljából 10 percen át 3 ml metanollal keverjük, a szuszpenziót 0 °C-ra lehűtjük, a tiszta terméket leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. DC: [kloroform-metanol (85 : 15)]: Rf=0,76, [kloroform-metanol-víz (16 : 6 : 1)]: Rr=0,94. 4.3 lépés H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[dl-/?-(3-fenoxi-feniI)]Gaba-OH 943 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-(3-fenoxi-fenil)]Gaba-OBzl (4.2 lépés) 30 ml dimetilformamiddai készített oldatát 100 mg, aktív szénre felvitt palládium (10%) hozzáadása után 4 órán keresztül szobahőmérsékleten és normál nyomáson hidrogénezzük. Az oldatot feldolgozás céljából a katalizátor kiszűrése után nagy vákuumban 2 ml-re betöményitjük, a terméket 40 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk, leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. A nyersterméket további tisztítás nélkül használjuk fel a következő, 4.4 lépéshez (ciklizálás). 4.4 lépés CAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/i-(3-fenoxifenil)]Gaba _ 811 mg nyers H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-(3-fenoxi-fenil)]Gaba-OH (4.3 lépés), 784 mg N-hidroxi-benztriazol és 1,20 g N,N'-diciklohexil-karbodiimid 580 ml dimetilformamiddai készített oldatát 20 órán át 50 °C hőmérsékleten tartjuk. Az elegy feldolgozása céljából az oldószert nagy vákuumban, körülbelül 30 °C-on lepároljuk, és a maradékot 20 ml etilacetáttal eldörzsöljük. A kivált diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet etilacetáttal 200 ml-re felhígítjuk, három alkalommal, 50-50 ml n vizes oxálsav-oldattal, majd vízzel semlegesre mossuk, nátriumszulfát felett megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket tisztítás céljából 600-lépcsős ellenáramú megosztásnak vetjük alá metanolvíz-kloroform-széntetraklorid rendszerben (2700 : 675 : 900 : 1575 térfogatrész). A 80-113 fokozatokban található fázisok (K = 0,17) tartalmazzák a két diasztereomer egyikét (A izomer), a 125-167 fokozatokban található fázisok (K = 0,31) a másikat (B izomer). A megfelelő fokozatok fázisait egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml terc-butanolban feloldjuk és liofilizáljuk, így mindig egy, fenti összegképletü, vékonyrétegkromatográfiásan egységes diasztereomert kapunk. DC: [kloroform-metanol (85 : 15)] A izomer: Rf=0,60, B izomer: Rr=0,51, [kloroform-metanol-víz (14 : 6 : 1)] A izomer: Rr=0,89, B izomer: Rr=0,83. 5. példa 1— Asn-Phe-Phe-(5-F-D-trp)-Lys-Thr-Phe-[/?-(l-naftil)]Gaba -1 - B izomer (5-F-D-trp = 5-fluor-D-triptofil) 147 mg Asn-Phe-Phe-(5-F-D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/?-(l -naftil)]— Gaba —- B izomer képletü védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 2,5 ml, 89 térfo5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
