187803. lajstromszámú szabadalom • Eljárás aminosavak N-(vinblasztinoil-23)-származékainak és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 187.803 2 keveijük 15 percig 0 °C-on. Az oldatot ezután nátriumhidrogénkarbonáttal semlegesítjük és hatszor extraháljuk 15 ml diklórmetánnal. A szerves fázisokat vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és addig koncentráljuk, amíg 10 ml-es térfogatot nem kapunk. Az azidoldatot ezután 300 mg etiltriptofanáttal reagáltatjuk 4 °C- on keverés közben. A reakciót vékonyrétegkromatográfiásan ellenőrizzük (éter, metanol). 6 nap múlva a reakciót befejezzük és a reakcióterméket szilikagél oszlopon (18 cm, 30 g), tisztítjuk. 15 ml-es frakciónként eluáljuk. Eluálószerként egymást követőleg a következő elegyeket használtuk: 96 rész ammóniával telített éter 4 rész metanol frakciók 1-49, 92 rész ammóniával telített éter 8 rész metanol frakciók 50-57, 86 rész ammóniával telített éter 14 rész metanol frakciók 71-90. Az 50-57. frakciók tartalmazzák az Ic reakcióterméket (108 mg). A szulfátot éteres kicsapással állítjuk elő (2%-os kénsav/etanol). A szulfát UV-spektruma (CH3OH) max: 224 (4,63) - 272 (4,32) min: 247 (4,03). inflexiós pont: 286 (4,22) - 312 (3,72) IR spektrum (szulfát) (KBr) 3420 - 3060 - 2960 - 2930 - 2880 - 2600 (csúcs)- 1725 - 1660 - 1615 - 1500 - 1455 - 1430 - 1375- 1230 - 1105 - 1060 - 1015 - 920 - 745 cm'1, A bázis NMR spektruma (CDCl3 360 MHz ppmban 9,46 s 1 H 7,53 4 1 H 4,94 q !R 8,34 s 1 H 7,30 d 1 H 4,18 d ÎH 7,92 s 1 H 6,51 s 1 H 4,05 2 2H 7,67 d 1 H 6,04 s 1 H 3,77 s 5H 7,59 d 1 H m. s. körül központ 5,81-nél 3,58 s RH 3,47 s 1H 2,82 s 2H 2,77 s 3H 2,59 s 1H 1,14 t 3H 0,95 t 3H 0,87 t 3H A bázis tömegspekttuma DCI izobután M+ 1+ 954-nél M + 14-f 1+ 968-nál M + 28 + l + 982-nél ionok 153 - 155 - 157 - 171 - 172 185 -186 - 199 - 213 - 223 - 227 - 255 - 257 - 279 - 281 - 283 - 285 - 349 - 398 - 459 - 516 - 569 - 952 - 953 - 955 - 967 - 969 - 981 - 983-nél a CjeHegNeOg képlet alapján a mólsúly: 953,208. 3. példa N-(0,4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-23-cil-B)izoleucinát 0,4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-ß-hidroxid 15 ml metanollal és 45 ml In sósavval készített oldatát -7°C-ra hűtjük (0,6 g, 0,79 mmól fenti vinblasztint a 4 203 898 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 24. oszlopa, 51. sora szerint állítottuk elő). 0,15 g nátriumnitritet adunk az oldathoz és 13 percig -7,C-ig keverjük. Vizes telített nátriumhidrogénkarbonát oldatot adunk hozzá, amíg a pH = 9 értéket el nem érjük, majd a kapott oldatot négyszer extraháljuk diklórmetánnal. Az összeöntött szerves fázisokat telített vizes nátriumklorid oldattal mossuk és vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk. Az oldatot 15 ml-re koncentráljuk és 1,25 mmól etiüzoleucinátot adunk hozzá. Az elegyet négy napig hűtőszekrényben hagyjuk állni. Az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk, a maradékot 60 g szilíciumdioxidot tartalmazó oszlopon kormatografálva tisztítjuk. Eluálószerként éter és ammóniával telített metanol 96 : 4 arányú elegyét használjuk. Ily módon 0,25 g (35%) amorf cím szerinti terméket kapunk. Tömegspektrum: (molekula ionizáció izobután) 880 (M+), 894, 836, 849, 832, 445; 391, 335 cm'1 C51H69N508 képlet alapján mólsúly: 880,1 Op.: 180-190 °C <xD = 104° (c = 0,154) IR (C I Cl,) 3470, 2970, 1728, 1655, 1612, 1502 cm ' UV . Ti,,014) 289, 268, 216 nm NMR (CDClj) 7,9 (NH), 654 és 6,06 H9, H12, 5,81 (Hm-H15) 4,60 [CHCo2(NH), 3,76 C02CH3, 3,58 CH3--O, 3,33 és 2,85 (H3A és H3B), 2,73 (N — CH3), 0,69 (H-15). Akut toxieitás - LDS0 meghatározás A 2. példa szerinti N-(0,4-dezacetil-dezoxi-4'vinb!asztin-23-oil-ß)-etil-triptofanät akut toxieitását nőnemű NMRI egéren határoztuk meg. Egyszeri injekcióval intravénásán oltottuk be a gyógyszert növekvő dózisokban. A mortalitás %-át idő függvényében határoztuk meg. A fenti vegyület (dezoxi VTrpE) LD50 értékeit és a referens vegyület LD,0 értékeit az alábbiakban tüntetjük fel: A dezoxi-vinblasztin (dezoxi VBL)-ként jelöljük: Gyógyszer LDJ0 dezoxi-VBL 20 dezoxi-VTrpE 91,5 (azaz Ic vegyület) A dezoxi VTrpE vegyület tehát az összehasonlító vegyületnél kevésbé toxikus. Antitumor hatás A dezoxi VRrpE szulfát sójának kemoterápiás hatását limfoblasztikus leukémia L 1210 és P 388 esetében vizsgáltuk. 1. L 1210 5 10 15 20 25 30 33 40 45 50 55 eo 5
