187734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fogszuvasodás elleni antigén- készítmények és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 187 734 2 1. táblázat Hígítás Kontroll Immunizált 1/20 1,35 ±0,275 1,996 ±0,01 1/40 0,91 ±0,21 1,859 ±0,09 1/80 0,747 ±0,21 1,64 ±0,21 1/160 0,566 ±0,13 1,33 ±0,29 1/320 0,386 ±0,09 0,968 ±0,27 1/640 0,262 ±0,06 0,677 ±0,20 1/1280 0,18 ±0,05 0,430 ±0,13 1/2560 0,115±0,03 0,296 ±0,Q8 , A Cohen és mtársai (1979) által leírt 19. kísérletben kontroll majmokat hasonlítottak össze olyan immunizált majmokkal, amelyeknél az immunanyag Streptococcus mutans Ingbritt törzsből kemosztátban 0,05/óra hígítási sebességgel (D) tenyésztett sejtekből kinyert sejtfal volt. E kísérleti állatoknál a kifejlődő szuvasodás mértékét a 2. ábrán mutatjuk be. Az ábrából jól látható, hogy a D = 0,05/óra hígítási sebességgel tenyésztett sejtekből nyert sejtfal kifejezett védőhatást fejt ki. A számszerű értékeket a 2. táblázatban foglaltuk össze. 2. táblázat A kísérlet Szuvasodás középértéke + SE kezdete óta eltelt idő (hónap) Kontroll Immunizált 11 0 0 16 1,0 ±0,45 0 18 1,4 ±0,75 0 21 2,4 ±0,97 0 25 3,2 ±1,88 0 29 3,4 ±1,63 0 31 3,6 ±1,60 0,33 ±0,3 34 5,2 ±1,67 0,33 ±0,3 36 5,75 ±1,86 0,33 ±0,3 45 7,25 ±2,62 1,33 ±0,29 A kísérletek különböző szakaszaiban vett szérummintákban a C antigén elleni antitest szintet az ELISA-módszerrel határoztuk meg, és megállapí tottuk, hogy a D = 0,05/óra hígítási sebesség mellett tenyésztett sejtek sejtfalával immunizált állatok esetében a képződő antitestek mennyisége nagy, és kifejezetten nagyobb, mint a kontroll állatok esetében. A 3. ábrán és a 3. táblázatban a kísérletek kezdete után 3 évvel vett minták vizsgálati eredményeit mutatjuk be. A magas C antigén elleni antitest szint és a szuvasodás elleni védőhatás között szoros összefüggés van. 3. táblázat, Hígítás Kontroll Immunizált 1/20 0,262 ±0,08 0,752 ±0,15 1/40 0,253 ±0,07 0,478 ±0,08 1/80 0,188 ±0,04 0,400 ±0,05 1/160 0,173 ±0,04 0,330 ±0,04 1/320 0,144 ±0,02 0,228 ±0,04 1/640 0,145 ±0,03 0,181 ±0,04 Antitest-válaszok immunizált majmok esetében A sejtfallal immunizált állatokból levett szérum C antigén elleni antitest tartalmú. Ez immundiffúziós vagy immunelektroforézises módszerrel, tiszta C antigént használva, könnyen kimutatható. Ilyen antitest viszont nem mutatható ki a nem immunizált kontroll állatokban. így nyilvánvaló, hogy a C antigén jelenléte összefügg az immunizált majmoknál kialakult védőhatással. Laboratóriumunkban immunizációs kísérleteket különböző vakcinákkal 12 éve végzünk. E kísérletek szérum-mintái még rendelkezésre állnak, és meg is vizsgáltuk, hogy tartalmaznak-e C antigén elleni antitestet. Az eredmények, amelyeket a 4. táblázatban foglaltunk össze, igazolják, hogy a védőhatás összefügg a C antigén elleni antitest jelenlétével. 4. táblázat Kísérlet száma Vakcina Szuvasodáscsökkenés %-ban C antigén ellenanyag 4 sejtfalak 100 + 11 sejtek 50 + 14 sejtek 60 + 17 GTF (Glükoziltranszferáz) 0 " 19 (30 sejtfalak hónap) 100 + Tiszta C-antigénnel végzett immunizálás Az 1. és 2. ábrából látható, hogy a C-antigént tartalmazó sejtfal immunizáló hatású. Ugyanezt állapítottuk meg a tiszta C-antigénről is, majmokon végzett immunizációs kísérleteink során. A C-antigént 50 pg-os dózisokban 10% alumíniumhidroxidot tartalmazó sóoldatban szubkután adagoltuk a kísérleti állatoknak. A kísérletek kezdetén a kontroli-csoport 48,7 hét átlagkorú és 1,08 kg átlagsúlyú 7 nőstény és 3 hím majomból, míg a C-antigénnel immunizált kísérleti csoport 49,9 hét átglatkorú és 1,29 kg átlagsúlyú 3 nőstény és 4 hím majomból állt. A C-antigén elleni antitestet szintén az ELISA- módszerrel, majd a mikrolemez-módszerrel (Voller és mtársai, Flowline Publication, 1977) határoztuk meg. Minden mintánál 1/1000-es hígítást alkalmaztunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
