187676. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teljesen védett dezoxiribodinukleotidok előállítására
1 187 676 2 mossuk le. Az elució menetét vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal követjük, s a megfelelő egyesített frakciók bepárlása után a teljesen védett dinukleotidokat az 1. példában ismertetett módon nyerjük ki színtelen, jól kezelhető, szilárd formában. A G-T szekvenciát tartalmazó származék súlya: 1,33 g; kitermelés: 68,5%. Szilanizált szilikagél rétegen, 30 : 70 arányú víz : aceton elegyben futtatva egységes anyag; Rf=0,75. A 95%-os etanolban mért spektrális adatok a következők: a I 250 „ ., 280 _ c_ X„m =248 nm;E260 = 0,96; E ^ = 0,57. A T-T szekvenciát tartalmazó származék súlya: 1,35 g; kitermelés: 75%. A fenti vékonyrétegkromatográfiás rendszerben vizsgálva egységes; Rf=0,71. A 95%'-os etanolban mért spektrális adatok a következők: ^, = 244 nm;E^ = 0,92; n 280 E 260 0,54. A C-T szekvenciát tartalmazó származék súlya: 1,39 g; kitermelés: 71,8%. Az anyag a fenti rendszerben vékonyrétegkromatográfiásan egységes; Rr=0,70. A 95%-os etanolban mért spektrális adatok a következők: Xmax =271 nm;E |-J=0,93; „ 280 E26Ő 0,46. 5 10 15 20 25 3. példa 30 Teljesen védett, A-A szekvenciát tartalmazó dezoxiribodinukleotid előállítása 0,90 g (1,5 mmól) N6-benzoil-dezoxiadenozin-3'(/4-klór-fenil/-/2-ciano-etil/-foszfát)-ot oldunk 35 6,6 ml 0,25 mólos vízmentes dioxános (4-klórfenilj-foszfoditriazolid oldatban (az oldat 1,65 mmól foszfoditriazolid reagenst tartalmaz). Az elegyet 15 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1,77 g (2,7 mmól) 5'-0-(4,4'-dimetoxi-trifenil- 40 metil)-N6-benzoil-dezoxiadenozin 2,7 ml vízmentes dioxánnal készített oldatához adjuk. A reakcióelegyhez 0,66 ml (8,25 mmól) N-metil-imidazolt adunk. Ezután a reakcióelegyet csökkentett nyomáson eredeti térfogatának körülbelül 50%-ára be- 45 pároljuk, majd szobahőmérsékleten 2 órán át állni hagyjuk. A további feldolgozást, beleértve az oszlopkromatográfiás tisztítást is, az 1. példában leírt módon végezzük. 1,52 g (71%) teljesen védett, A-A szekvenciát 50 tartalmazó dezoxiribodinukleotidot kapunk. Az anyag az 1. és 2. példában ismertetett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokban homogén; Rr=0,68. A 95%-os etanolban mért spektrális jellemzők: 55 %,ax=243 nm; E^=l,50. 4. példa 60 Teljesen védett, T-G szekvenciát tartalmazó dezoxiribodinukleotid előállítása 0,872 g (1,5 mmól) N2-izobutiril-dezoxiguanozin-3'-(/4-klór-fenil/-/2-ciano-etil/-foszfát)-ot ol- 65 dunk 6,6 ml 0,25 mólos vízmentes dioxános (4- klór-fenil)-foszfoditriazolid oldatban (az oldat 1,65 mmól foszfoditriazolid reagenst tartalmaz). Az oldatot 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1,47 g (2,7 mmól) 5'-0-(4,4'-dimetoxi-trifenilmetil)-timidin 5,4 ml vízmentes dioxánnal készített oldatához adjuk, és a reakcióelegyhez 0,66 ml (8,25 mmól) N-metil-imidazolt adunk. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson eredeti térfogatának körülbelül 40%-ára bepároljuk, majd szobahőmérsékleten 3 órán át állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet az 1. példában közöltek szerint dolgozzuk fel. A kapott, teljesen védett, T-G szekvenciát tartalmazó dinukleotid súlya: 1,36 g, kitermelés: 73%,. Az anyag az 1. és 2. példában leírt vékonyrétegkromatográfiás rendszerekben vizsgálva homogén; Rr=0,82. A 95%-os etanolban mért spektrális jellemzők a következők: ATM, = 247 nm; E — = 0,96; E — = 0,57. A hasonló módon előállított további 10 lehetséges (I) általános képletü, Ar helyén 4-klór-fenilcsoportot tartalmazó származék adatai a következők: Dimer Kitermelés, V Rr Km. (nm) A-G 68,3 0,80 246 A-C 69,6 0,78 246 A-T 69,0 0,75 244 C-A 72,0 0,69 245 C-G 68,6 0,77 270 G-A 67,0 0,64 246 G-C 68,4 0,75 270 G-G 68,0 0,80 263 T-A 74,0 0,70 243 T-C 74,3 0,77 272 5. példa Teljesen védett, C-G szekvenciát tartalmazó dezoxiribodinukleotid előállítása 6,98 (12 mmól) N2-izobutiril-2'-dezoxi-guanozin-3'-(/2-klór-fenil/-/2-ciano-etil/-foszfát)-ot 30 ml vízmentes piridinnel csökkentett nyomáson 30 °C- on bepárolva vízmentesítünk. A párlási maradékhoz 13,2 mmól (2-klór-fenil)-foszfoditriazolidot adunk 52,8 ml 0,25 mólos dioxános oldat formájában, és néhány perces keveréssel homogén oldattá alakítjuk. A reakcióelegyet 20-25 perc szobahőmérsékleten való állás után hozzáadjuk 14,2 g (21,6 mmol) 5'-0-(4,4'-dimetoxi-trifenilmetil)-N4-benzoil-2'-dezoxi-citidin 100 ml vízmentes piridinnel az előbbiekhez hasonló módon végzett bepárlásával kapott maradékhoz, és néhány perc keveréssel homogén oldattá alakítjuk. Ezután az elegyhez 5,6 ml (70 mmól) N-metil-imidazolt adunk, és szobahőmérsékleten 3 órán át állni hagyjuk. Az elegyet csökkentett nyomáson 30 °C-on bepároljuk. A maradékot 400 ml kloroformban oldjuk, négyszer 120 ml 0,2 mólos nátrium-dihidrogén-foszfát-oldattal extra háljuk. A szerves fázist 8-10 g vízmentes nátri5
